Bioquimica-espectrofotometria , Diapositivas de Bioquímica

¡Descarga Bioquimica-espectrofotometria y más Diapositivas en PDF de Bioquímica solo en Docsity!

ESPECTROFOTOMET

RÍA

Lic. José Manuel Arriaga Romero

PRINCIPIOS

ESPECTROFOTOMÉTRICOS

• (^) Características de la luz
  • Longitud de onda
    • Es igual a la distancia entre dos puntos idénticos sobre ondas de luz consecutivas
    • Mientras más cerca estén una onda de otra
      • La longitud de onda es más pequeña
      • La luz contiene mayor cantidad de energía
        • Hay mayor número de fotones en una distancia dada

• Espectro electromagnético
  • La unidad de la longitud de onda es el nanómetro 10 -
• 1 nm = m
• Se expresa por la letra griega lambda (λ)
  • En base a las longitudes de onda el espectro electromagnético se divide (UV) (VIS) (IR) en tres rangos 190 nm a 390 nm 390 nm a ± 750 nm mayor de 750 nm

Luz Luz Luz ultravioleta visible infrarroja

• La luz en el rango ultravioleta es invisible

• La luz en el rango visible excita las células retinianas - Percepción de colores

• La luz en el rango infrarrojo se percibe como y sus longitudes de onda se expresan en μm calor 10

•  - 1 μm = m 

• Las longitudes de onda menores a las del rango ultravioleta incluyen los rayos X y la radiación gamma - Tienen tanta energía que penetran los tejidos

• Las longitudes de onda mayores a las del rango infrarrojo (medidas en cm) incluyen a las ondas de radio

• El color percibido de una solución será dominado por

las longitudes de onda que son transmitidas (y

no por las absorbidas) por el soluto

• Las longitudes de onda absorbidas

son complementarias una de otra

• El color visible de una solución será complemento de las longitudes de absorbidas

y transmitidas

el onda que son

• Una solución de hemoglobina absorbe luz verde a 540 nm y se ve de color rojo
• Una solución de bilirrubina absorbe luz azul a 450 nm y se ve de color amarillo

• El patrón de absorbancias a diferentes longitudes de

onda es tan distintivo que un soluto puede un

soluto puede ser identificado por su espectro de

absorción

• Una curva de espectro de absorción es una

gráfica que muestra los patrones de

absorbancias de un soluto a diferentes

longitudes de onda

• Otro uso del espectro de absorción es para decidir

la longitud de onda a la que se hará un

análisis cuantitativo

• Debe elegirse la longitud de onda a la que la

absorbancia es mayor, debido a que aún una

pequeña cantidad de soluto puede producir na

cantidad medible de absorbancia

• Transmisión y absorción de

luz •^ Un^ espectrofotómetro^ utiliza^ una^ lámpara^ de

alta intensidad y mide la cantidad de luz que penetra la solución coloreada

• La proporción de luz que penetra la solución se llama transmitancia (T)

• La absorbancia se define como el logaritmo negativo de la transmitancia A = - log T = - log l/l o La fórmula simplificada para su cálculo,

habiendo aplicado una transmitancia de para l o y transformando l en %T, es: A = 2- log %T