Baño, centriguga y
campana de extracción
Preparación
Muestra 75
mg de
tejido joven
Congelar en N2
liquído para evitar
la formación de
cristales de hielo
Triturar la
muestra con un
mortero
Anadir 500
microlitros de tapón
de extracción
No debe pasar mucho
tiempo en la trituración
y la colocación del
tapon para así evitar la
degradación del DNA
Añadir un
agente de
los iones
Mg
Incubar en un baño
termico por 10 min
a 65°C
Pasado los 10 min, se
añade cloroformo en
campana
Pipetas, puntas esteriles,
microtubos, CTAB, EDTA,
Tris-HCl, NaCl, cloroformo,
isopropanol, etanol 70%, TE
EXTRACCIÓN
DE DNA
Añadir 450
microlitros de
cloroforma
isoamilito 24:1
Colocar la muestra en
la centrifuga durante 5
min a 13.000
revoluciones/min
DNA se encuentra en la
parte sup. despues de
centrigugado en fase
acuosa y tranferirla a
un nuevo tubo
Recuperar 400
microlitros de la fase
acuosa
Utilizar isopropanol
y añadir un volumen
equivalente a la
cantidad de fase
acuosa
Agitar y observar la
condensación de las
fibras del DNA
Colocar la muestra en un
recipiente con hielo
durante 5 a 10 min
Centrifugar de nuevo la
muestra durante 5 o 10
min a 13.000
revoluciones/min
El
precipitado
obtenido
contiene
DNA
Añadir 100
microlitros
de etanol al
70%
Se despega el precipitado
del fondo de microtubo y
se centrifuga por 2 min a
13.000 revoluciones/min
Eliminar el sobrenadante
con una pipeta con
cuidado de no arrastrar el
DNA precipitado
Dejar secar a
temperatura
ambiente por 5
min
Resuspender en
50 microlitros de
tapon TE
Obtener las
conclusiones de
la práctica
Conservar la muestra
a 4°C hasta que el
DNA se resuspenda
por completo
Conservar la muestra
a -20°C ó -80°C por un
largo plazo
FIN
