Reporte de Laboratorio de Bioquímica General. 06-09-2016
Extracción de ácido desoxirribonucleico de hígado de pollo.
Introducción. El ácido desoxirribonucleico (ADN) es
la molécula donde se encuentra toda la información
necesaria para que los seres vivos puedan funcionar
correctamente. A través del ADN se heredan
determinadas características de padres a hijos y así
sucesivamente de generación en generación. Fue
descubierto en 1869 por el medico suizo Friedrich
Miescher, quien deseaba saber que sustancias químicas
se encontraban en el núcleo de las células. En 1953
James Watson y Francis Crick descifraron la estructura
tridimensional en doble hélice de la molécula de ADN
(Bernath, V. 2011). Las dos hebras de ADN se
encuentran unidas mediante bases nitrogenadas por
medio de puentes de hidrogeno. Estas bases son
adenina, guanina, citosina y timina, donde adenina
siempre se empareja con timina y guanina con citosina.
Esta estructura confiere al ADN sus dos rasgos clave:
el orden de las bases contiene el código genético del
cromosoma, mientras que el enlace transversal de las
bases permite al ADN hacer copias exactas de sí mismo
(Parker. S. 2007). La extracción de ADN permite desde
su estudio morfológico general hasta la replicación in
vitro de este para su secuenciación y estudio molecular
del objeto de estudio.
El objetivo de esta práctica es la extracción de ADN de
hígado de pollo mediante sus propiedades
fisicoquímicas para su observación morfológica en el
microscopio.
Método. Para la extracción de ADN primeramente se
trituraron 3 hígados de pollo en un mortero con arena
añadiendo 50 ml de agua destilada para incorporar
todo. Después se filtró el tejido 2 veces y se midió el
volumen en una probeta. Se tomó un volumen igual de
NaCl 2 M. y se agregó junto con la muestra en un vaso
de precipitado. Posteriormente se agregó 1 ml de SDS
y 50 ml de alcohol al 96% sobre las paredes del vaso.
Una vez precipitado el ADN se tomaron 2 muestras en
portaobjetos y se procedió a su tinción con azul de
metileno durante 5 min y la observación al
microscopio.
Resultados y discusión. Al añadir el alcohol se fue
formando el precipitado de ADN y se observó la
separación de las capas, donde se apreció una ligera
presencia de precipitado con aspecto un poco fibroso
que correspondía al ADN (Imagen 1 y 2). “Las
moléculas de ADN precipitadas parecen un material
fibroso, como los hilos blancos de una telaraña” (Levi,
S. Mathern, J. 2004).
La muestra de ADN en el microscopio se pudo apreciar
de una buena manera, donde en la muestra 1 se aprecia
una pequeña cadena de ADN bien coloreada de azul
debido a que absorbió el colorante (Imagen 3).
En la otra muestra vista en el microscopio fue más
grande y donde se aprecia un poco más la doble hélice,
sin embargo, no absorbió el colorante.
Imagen 1 y 2: Vista de distintos ángulos de la capa
formada en la muestra una vez agregado el Alcohol
Imagen 3: Muestra 1 de ADN, se observa la pequeña
hebra y muy levemente la doble hélice en su interior.
