¡Descarga Guia de Histología parte 1 y más Apuntes en PDF de Histología solo en Docsity!
Técnica histología y microscópica
En la histología se utilizan microscopios: ópticos, electrónicos (ME) y de fuerza atómica (MFA).En los electrónicos se divide en 2: de transmisión (MET) o de barridos (MEB). Las técnicas auxiliares que se utilizan para la histología se encuentran:
- Histoquímica
- Inmunocitoquímica y técnicas de hibridación
- Radio autografía
- Cultivo de tejidos y órganos
- Separación de células y orgánulos por centrifugación diferencial
- Microscopios y técnicas microscópicas especializadas
Preparación de muestra de tejido u órgano
1 paso : Fijación para conservar la estructura. - Mediante el empleo de sustancias químicas individuales o mezcladas para conservar y permitir el tratamiento ulterior. Se utiliza para:
a. Abolir el metabolismo b. Impedir la degradación de las células o tejidos por autolisis c. Destruir los microorganismos patógenos (bacterias, hongos y virus) d. Endurecer el tejido ( por la formación de enlaces cruzados)
El fijador de uso más común es la formalina (solución acuosa de formaldehído al 10%) y ayuda a
preservar la estructura y los componentes extracelulares al reaccionar con los grupos amino de las proteínas, pero no reacciona con los lípidos.
2 paso: Inclusión en parafina de la muestra con el fin de permitir su corte. -Se infiltra en un "medio de inclusión" para cortes de 5- 15 μm. Luego se lava y se deshidrata por soluciones alcohólicas al 100%. Después se aclara por solventes orgánicos^ (xileno o tolueno) para extraer al alcohol. Cuando la parafinafundida se ha enfriado y endurecido, se empareja para formar un bloque adecuado, para cortarlo por el micrótomo que lo corta en rebanadas finas. Se añade al portaobjetos un medio de montaje (albúmina, pineno, o resinas acrílicas) para que se adhiera. 3 paso: Tinción de la muestra para permitir su examen .-Los cortes de parafina son incoloros, por lo que la parafina debe disolverse y extraerse (con xileno o tolueno) y luego rehidratar los tejidos con alcoholes de concentraciones decrecientes. Después en el portaobjetos la muestra se tiñe con hematoxilina en agua.
Como colorante contraste, eosina (soluble más en alcohol que en agua) se vuelve a deshidratar la muestra en soluciones alcohólicas de concentración creciente y después se tiñe con eosina en alcohol. (Opcional) 4 paso : Muchos componentes se pierden durante la preparación de la muestra, para retenerlos, se utiliza otros métodos de fijación como por ejemplo: para conservar los lípidos neutros deben utilizarse cortes por congelación de tejido fijado en formalina y colorantes que se disuelvan en grasas; para conservar estructuras de la membrana se usan fijadores con metales pesados (permanganato y tetróxido de osmio). La hematoxilina y la eosina se utilizan para poner en evidencia las características estructurales, pero no estructuras como elastina, fibras reticulares, membranas basales y lípidos.
Histoquímica y cito química
Los procedimientos químicos específicos pueden dar información acerca de la función de las células y los componentes extracelulares del tejido. Estos métodos pueden tener un fundamento en la unión específicade un colorante en el uso de anticuerpos marcados con un colorante fluorescente dirigidos contra un componente celular en particular o en actividad enzimática inherente de un elemento de las células.
Microscopía
Un microscopio, ya sea simple(una lente) o compuesto (varios lentes), es un instrumento que
aumenta el tamaño de una imagen y ver detalles no posibles a vista simple. La resolución es la
distanciaque debe de haber entre 2 objetos para que se vean separados y que no parezcan uno
solo. La resolución del ojo humano está determinada por el espacio que hay entre las células foto
receptoras adyacentes en la retina; y el microscopio amplio una imagen para que la retina
resuelva la información. El microscopio de mayor utilización es óptico de campo claro.
La resolución depende también de: la longitud de onda de la luz, espesor de la muestra, calidad
de su fijación y la intensidad de tinción.
El poder de la resoluciónes la capacidadde un lente o sistema óptico del microscopio de producir
imágenes separadas de objetos que están muy cerca del otro.La lente ocular aumenta la imagen
producida por la lente objetivo, pero no puede aumentar la resolución.
Mientas que el límite de resolución es la distancia mínima que debe existir en dos puntos para
que puedan ser discriminados
Componente Descripción Base Parte de metal o plástico sobre la cual descansa el resto de las partes del microscopio.
refringencia. Significa, que cuanto mayor es el índice de refracción más se doblan
los rayos al entrar en ese medio.Los prismas desvían la luz que los incide hacia su base, tanto más cuanto mayor sea la potencia óptica del prisma. Esta potencia se
mide en “dioptrías prismáticas”.
http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/capitulo3_4.htm
http://www.apsnet.org/EDCENTER/INTROPP/LABEXERCISES/Pages/Microscopio.aspx
Un artefacto es un error en el proceso de preparación por la poca pureza de las sustancias
químicas y reactivos utilizados
Tinción
Tinción Tipo Características Uso Ejemplo Hematoxilina Básica / Acidofílica
Tiñe núcleos, ácidos nucleicos y estructuras basofílicas (mitocondrias y ribosomas) en azul.
Tinción histológica general
Eosina Ácida / Basofílica
Tiñe proteínas y estructuras con afinidad por los ácidos en diferentes tonos de rojo
Tinción histológica general
Tinción hematoxilina- eosina
Bicomponente Anfifílica
- Los núcleos aparecen en azul (hematoxilina).
- Los ácidos nucleicos asociados a proteína (ej. ribosomas) en violeta
- Fibra muscular en rojo
- Tejido conectivo en rosado
Tinción histológica general
parabasales entre turquesa y azul
- Las células metaplásicas muestran coloraciones mezcladas (por ejemplo, verde y rosa). Tinción de Romanowsky
Pancromática de Romanowsky
Extendidos sanguíneos
Tinción de Wright
Tinción de Giemsa
Tinción de Jenner
Tinción de Leishman
Tinción de Field
Tinción de May Grünwald
Tinción de May Grünwald- Giemsa
Tinción con azul de metileno
Supravital
metacromática
Tiñe de azul oscuro restos de ácidos nucleicos, y los proteoglicanos ácidos en varios tonos de violeta.
Diagnóstico de anemias regenerativas
Demostración de
estructuras
metacromáticas
Tinción con azul de prusia
Tiñe los depósitos de hemosiderina y hierro de color azul-celeste
Diagnóstico de hemopoyesis ineficaz, y hemocromatosis
Tinción tricrómica de Masson
Tricrómica • Los núcleos aparecen en marrón o negro.
- Keratina y músculo en rojo
- Los citoplasmas aparecen en tonos de rosa.
- El colágeno y el
- Rojo brillante = fibrina
- Rojo = músculo Tinción tricrómica de Gömöri
Tricrómica Argéntica
Tinción de Warthin-Starry
Argéntica
Tinción de Von Kossa
Tiñe de tonos de marrón y negro los depósitos de fosfato inorgánico en hueso.
Tinción de Golgi
Tinción de Bielchowsky
Tinción de Jones
Tinciones para microbiología
Tinción de Gram
Tinción de Ziehl-Neelsen
Tinción de Schaeffer- Fulton
Tiñe endosporas de verde y bacterias en rojo
Sirve para diferenciar endosporas y bacterias.
Tinción de Conklin
Tiñe endosporas de verde, similar a la tinción de Schaeffer-Fulton.
Tinción de Grocott
Detección de microorganismos, en especial fúngicos.
Tinción de Dieterle
Búsqueda de microorganismos (por ejemplo, Treponema pallidum )
Tinción negativa
Tiñe el exterior, pero no el interior de células y estructuras.
Es muy utilizada en microscopía electrónica. En microscopía óptica, para identificar microorganismos encapsulados.
Tinción con carmín
Tiñe el glicógeno de intenso color rojo.
Tinciones para proteínas
Tinción argéntica
En función del fijado, tiñe proteínas y ácidos nucleicos en tonos de negro y marrón.
Tinción con Rojo Congo
Tiñe el amiloide de un intenso color rojo.
Se utiliza con hematoxilina/eosina en patología cuando se busca amiloide.
Tinción con Alcian Blue
Tiñe mucopolisacáridos ácidos de color azul.
Tinción con Azul de Coomassie
Tiñe inespecíficamente proteínas de color azul.
Tinciones para ácidos nucleicos
Tinción de Feulgen
Tiñe el ADN y los cromosomas de color rojo-violeta.
Naranja de acridina
Tiñe ADN y cromosomas de color verde fluorescente, ARN y ribosomas en color rojo fluorescente.
DAPI Tiñe ADN de color azul- celeste fluorescente.
Bromuro de etidio
Tinciones para lípidos
Tinción con LuxolFast Blue
Tiñe la mielina de color azul-celeste.
Técnica de la Hematina ácida de Baker
Tiñe fosfolípidos y nucleoproteínas de color azul negro.
https://
mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/ampliaciones/tabla-colorantes.php
Los componentes de los tejidos colorantes que se colorean bien con los colorantes básicos (carga
neta +) son basófilos, así que los que se colorean bien por los colorantes ácidos (carga neta -) son
acidófilos.
La metacromasia es una modificación de la absorbancia donde ciertos colorantes básicos
reaccionan con componentes hísticos que hacen cambiar su color normal del azul al rojo o
púrpura
Histoquímica enzimática
Las técnicas histológicas se utilizan para localizar enzimas, la fijación aldehídica débil suele ser
el método preferido. En general se usa un reactivo de captura, que puede ser un colorante o un
metal pesado. En una reacción típica para detectar una enzima hidrolítica, el corte histológico se
coloca en una solución que contiene un sustrato (AB) y un agente de atrapamiento (T)que
precipitara para resultar como AT el producto final atrapado y B es el sustrato hidrolizado.
Inmunocitoquímica
La especifidad de la reacción entre el antígeno y el anticuerpo es fundamental de esto. Los
anticuerpos (o inmunoglobulinas) son glucoproteínas por células específicas del sist. Inmunitario
en respuesta a una proteína extraña (antígeno). En general los colorantes fluorescentes
(flurocromos) son sustancias químicas que absorben longitudes de onda diferentes (ej
ultravioleta) y luego emiten luz visible de onda específica (verde, amarillo, rojo). La fluoresceína
es el flurocromo más frecuente y emite verde.
Se utilizan 2 tipos de anticuerpos:
1. Policlonales- Producidos por animales inmunizados
2. Monoclonales- Producidos por líneas celulares productoras de anticuerpos inmortalizadas
de duplicación continua
La inmunofluorescencia directa vale de un anticuerpo primario marcado con fluorocromo.
La inmunofluorescencia indirecta (técnica de emparedado/ capa doble) vale de un anticuerpo
secundario dirigido con un anticuerpo primario.
ORGANELO
O
INCLUSIÓN
TAMAÑO
(μm)
CARACTERISTIC
AS EN M.O
CARACTERÍSTIC
AS EN M.E
FUNCIÓN EJEMPLOS D
PATOLOGÍAS
ASOCIADOS
RER Superficie
Con frecuencia, se
ve una región
basófila del
citoplasma que
recibe el nombre de
ergatoplasma
Los túbulos,
cisternas y sacos
aplanados están
limitados por la
membrana con
ribosomas adosados
Fija los ribosomas
que intervienen
en la traducción
del mRNA para
las proteínas
destinadas a la
secreción o a la
inserción en la
membrana.
También participa
en las
modificaciones
químicas de las
proteínas y en la
síntesis de lípidos
de membrana
Seudoa
ondroplasia
depósito
cristales
dihidrato
fosfato de calc
REL En todo el
citoplasma
No visible
El citoplasma
puede exhibir una
eosinofilia bien
definida
Los túbulos,
cisternas y sacos
aplanados están
limitados por la
membrana sin
ribosomas adosados
Participa en el
metabolismo de
lípidos y
esteroides, en el
almacenamiento
de Ca+2 y en la
desintoxicación
de xenobióticos
reticular
endoplasmátic
hepatocítica
Aparato de
Golgi
Superficie
A veces se ve una
región de “tinción
negativa”. En las
impregnaciones
con metales
pesados, aparece
un entramado
reticular.
Las pilas o rimeros
de sacos
membranosos
aplanados con
frecuencia se hallan
contiguos al núcleo.
Modificación
química de las
proteínas
Clasifica y envasa
moléculas para su
secreción o su
transporte hacia
otros organismos
células I
renal
Visible en células
vivas con
microscopio de
interferencia
Vesículas de
secreción
0.05- 1 Se ven sólo cuando
son muy grandes
Muchas vesículas
limitadas la
membrana, de
tamaño
relativamente
pequeño y diámetro
uniforme, con
frecuencia
polarizadas hacia un
lado de la célula
Almacenan
proteínas de
secreción y
transportan hacia
la membrana
plasmática
Lewy de
enfermedad
parkinson
insulínica
Mitocondria 0.2-7 A veces, se observa
en situaciones
favorables unos
puntos oscuros
muy pequeños,
visibles en las
células vivas con
colorantes vitales
Membrana doble:
una externa lisa y
una interna con
pliegues (crestas)
Producción
aerobica de en la
forma de ATP
(fosforilación
oxidativa, ciclo de
Krebs)
Iniciación de la
apoptosis
Miopatías
mitocondriales, com
los sindromes MERR
MELAS y de Kearn
Sayre y la atrofia ópti
hereditaria de Leber
Endosomas 0.02- 0.5 No visibles Estructuras
tubolovesiculares
con luz subdividida
en las cuales se ve
material
electrolúcido u otras
vesículas más
pequeñas.
Transporte de
material de
endocitosis.
Biogénesis de
lisosomas.
receptor M-6-P
Lisosomas 0.2- 0.5 Solo visibles con
tinciones
Vesículas limitadas
por membrana
Digestión de
macromoléculas.
por
