FUNDACION UNIVERSITARIA DE CIENCIAS DE LA SALUD
FACULTAD DE MEDICINA
HOSPITAL DE SAN JOSE
AREA DE BIOMEDICA III
GUIAS DE LABORATORIO
Novena edición
Docentes: Marcela López
Rafael Guerrero
Alba I. Arango
Andrea Hincapié
Enero 2018
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Laboratorio de biomedica, Guías, Proyectos, Investigaciones de Biomedicina
Guía para laboratorio de biomedica y explicaciones
Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones
2018/2019
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FUNDACION UNIVERSITARIA DE CIENCIAS DE LA SALUD
FACULTAD DE MEDICINA
HOSPITAL DE SAN JOSE
AREA DE BIOMEDICA III
GUIAS DE LABORATORIO
Novena edición
Docentes: Marcela López Rafael Guerrero Alba I. Arango Andrea Hincapié
Enero 2018
CONTENIDO
Página
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
1. Algunas pruebas bioquímicas para evaluar función cardíaca 17
2. Algunas pruebas bioquímicas de función
hepática 24
3. UROANALISIS: estudio bioquímico elemental de orina. Otros líquidos
corporales 30
4. Algunas pruebas bioquímicas de función
renal 39
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
1. CONDICIONES Y FACTORES DE RIESGO EN EL LABORATORIO DE BIOMEDICA
En el Laboratorio de Biomédica, existen una serie de riesgos de toda clase, que deben conocerse con el fin de prevenir sus posibles efectos negativos sobre las personas que allí laboran; no solamente el personal profesional sino también a los estudiantes que desarrollan allí sus prácticas y que se encuentra expuesto frecuentemente a riesgos similares, aumentados a veces precisamente por no tener conocimiento de la exposición frente a diferentes factores según la actividad a desarrollar.
Entre los riesgos que se originan en el Laboratorio se encuentran:
• Riesgo Biológico: Son los producidos por exposición a productos patológicos contaminados
con virus, hongos, bacterias, parásitos. Pueden producir enfermedades o lesiones a nivel:
a) Respiratorio: Por inhalación de partículas infectantes. b) Digestivo: A través de manos sucias y objetos diversos. c) Mucosas: Especialmente la conjuntiva, por salpicaduras d) Piel: Por salpicaduras, derrames y pinchazos
• Con el propósito de controlar éste riesgo, se han creado una serie de normas denominadas de Bioseguridad
y se han establecido cuales son las situaciones y/o actividades que pueden generar riesgo en el personal que hace uso del Laboratorio de Biomédica.
• Riesgo Químico: Son los generados por exposición a gases, vapores, humos, líquidos,
sólidos, polvos.
• Los efectos nocivos de la gran cantidad de sustancias químicas que se utilizan en el Laboratorio, pueden
tener una acción cáustica o tóxica, además, pueden producir quemaduras de piel, ojos, problemas respiratorios y cáncer.
23
• Las sustancias químicas pueden tener efectos acumulativos cuando se utilizan en forma constante, aunque
cada dosis sea al parecer inocua. En otros casos, la acción del tóxico está relacionada con el tiempo de exposición o con su concentración o vía de ingreso al organismo.
• Riesgo Físico: son los derivados de la exposición a radiacionesionizantes y no ionizantes,
temperaturas extremas (frío o calor), iluminación inadecuada, presiones anormales, vibraciones y ruido.
• El calor y/o el frío intenso, constituyen un riesgo presente en el Laboratorio Clínico, así mismo, el ruido
provocado por impresoras y otros equipos; las fuentes de radiación electromagnética incluyendo las radiaciones ultravioleta y las infrarrojas.
• Producen fatiga, sordera, lesiones en piel y nervios, músculos, articulaciones, enfermedades del sistema
sanguíneo, entre otras.
• Riesgo de Inseguridad: Son los que se presentan en las instalaciones o puesto de trabajo
que pueden producir accidentes.
• Almacenamiento, transporte y manipulación de materiales en forma inadecuada.
• Incendio y explosión, gases comprimidos (autoclaves), electricidad.
• Equipos mecánicos defectuosos
• Falta de orden y aseo.
• Riesgo Ergonómico: Son los producidos por una inadecuada interacción entre el hombre y
la maquina y su puesto de trabajo, dentro de ellos encontramos:
• Posturas y movimientos inadecuados
• Diseño inadecuado del puesto de trabajo
• Manejo de cargas en forma inadecuada
1.6 Riesgo Psicosocial : son los originados por la mala interacción de las condiciones de trabajo y las características de cada persona, dentro de ellos se consideran:
• Ritmo de trabajo
• Contenido de las tareas
• Trabajo repetitivo
• Incentivo de producción
• Sobrecarga de trabajo
• Conflicto de autoridad
• Dificultas para la comunicación
Producen fatiga mental, stress o tensión. Pueden llegar a producir enfermedades psicosomáticas. 1
2. Situaciones de exposición a riesgo biológico en el Laboratorio de Biomédica.
ACCION SITUACIONES DE EXPOSICIONES
• Manejo de jeringas, agujas y materiales
cortopunzantes.
• Inoculación accidental de sangre u otros fluidos
corporales.
• Manejo de frascos, ampollas y otros recipientes
que contengan sangre o fluidos corporales.
• Desperfectos o rupturas en los recipientes que pueden
generar contacto accidental con sangre u otros fluidos corporales.
• Manipulación de muestras y transporte de
materiales.
• Contacto con sangre, fluidos corporales y materiales
potencialmente infecciosos, por salpicaduras, aerosoles o derrames.
1 Salud Ocupacional. Seguro Social Convenio 0129/98.ARP/ISS
• Plástico - protege frente a sustancias corrosivas suaves y sustancias irritantes.
Se recomienda una talla ajustada para no alterar la manipulación de materiales ó instrumentos, antes de usar los guantes hay que asegurarse que no presenten agujeros, pinchazos o rasgaduras.
La forma correcta de quitarse los guantes de las manos, es hacerlos desde la muñeca hacia los dedos, teniendo cuidado de que la parte exterior del guante no toque la piel.
Los guantes desechables deben tirarse en los contenedores designados para tal efecto. Deben cambiarse entre pacientes y cada vez que se rompan. El personal debe abstenerse de tocar con las manos enguantadas alguna parte del cuerpo y manipular objetos diferentes a los requeridos durante el procedimiento.
Se deben utilizar para: -Manipular muestras o superficies contaminadas con sangre o líquidos corporales. -Tocar la sangre o los líquidos corporales, las mucosas o la piel no intacta de todos los pacientes.
- Efectuar venopunciones u otros procedimientos de acceso vascular. -No reutilizarlos en exceso, en caso de romperse quitarlos de inmediato, lavarse las manos y volver a colocarse guantes nuevos. -Cambiarlos después de la atención de toma de muestras y durante el turno las veces que sea necesario.
3.1.4 Protección Ocular y Uso de Tapabocas
Con esta medida se previene la exposición de las membranas mucosas de la boca, la nariz y los ojos, a líquidos potencialmente infectados.
Se indican en procedimientos en donde se manipule sangre o líquidos corporales, cuando exista la posibilidad de salpicaduras (aerosoles) o expulsión de líquidos contaminados con sangre. Las gafas protectoras deben ser lo más cómodas posible, ajustándose a la nariz y la cara y no interferir en los movimientos del usuario
Las personas cuya visión requiere el uso de anteojos correctores (gafas recetadas), deben llevar las gafas protectoras sobre las recetadas sin que perturben el ajuste de las mimas; las personas que necesiten llevar lentes de contacto deben ser conscientes de los siguientes peligros potenciales:
• Será prácticamente imposible retirar las lentes de contacto de los ojos después de que se haya
derramado un sustancia química en el área ocular.
• Las lentes de contacto interferirán con los procedimientos de lavado de emergencia.
• Las lentes de contacto pueden atrapar y recoger humos y materiales sólidos en el ojo.Si se produce
la entrada de sustancias químicas en el ojo y la persona se queda inconsciente, el personal de auxilio no se dará cuenta de que lleva lentes de contacto.
Los tapabocas, deben estar elaborados con un material de alta eficiencia de filtración, para disminuir la diseminación de gérmenes a través de estos, durante la respiración, al hablar o al toser.
•.6. Ropa Protectora
Están indicados en todo procedimiento en donde haya exposición a líquidos de precaución universal
▲ Los gorros, blusas de manga larga y abotonada, delantal desechable lavable, evitan el contacto por
salpicaduras con material contaminado.
▲ La ropa debe ser cambiada cuando haya sido salpicada de sangre o demás líquidos corporales; y no debe
ser utilizada en otras áreas (cafetería).
Evitar deambular con los elementos de protección personal fuera de su área de trabajo. Mantener los elementos de protección personal en óptimas condiciones de aseo, en un lugar seguro y de fácil acceso. Las batas deben manejarse como material contaminado.
3.1.6 Manejo de Elementos Cortopunzantes:
Durante la manipulación, limpieza y desecho de elementos cortopunzantes (agujas, bisturís u otros), el personal de salud deberá tomar rigurosas precauciones para prevenir accidentes laborales después de manipularlos.
• Evitar cambiar elementos cortopunzantes de un recipiente a otro.
• Las agujas no deben volverse a cubrir, doblarse o quebrarse con las manos, separarse de jeringas
descartables o manipularse de algún otro modo con las manos.
• Una vez usadas las jeringas y agujas descartables, las hojas de bisturí y otros elementos cortantes deben
colocarse en envases resistentes a punciones para su descarte (guardianes), conteniendo además una solución de hipoclorito a 5000ppm.
• Evitar reutilizar material contaminado como agujas, jeringas y bisturís.
La distribución de accidentes con objetos cortopunzantes ocurre con la siguiente frecuencia en el Laboratorio, así:
Antes de desecharlo, durante su uso, mientras se desecha, después de desecharlo.
• En caso de accidente de trabajo con material cortopunzante, diríjase al servicio de urgencias del Hospital
de San José y colabore en la elaboración del reporte del accidente de trabajo.
4. Normas Específicas del Laboratorio
Además de las universales, el CDC especifica algunas normas adicionales para el trabajo en los laboratorios clínicos, ellas son:
• Mantener el lugar de trabajo en óptimas condiciones de higiene y aseo
• No fumar, beber, ni comer en el sitio de trabajo.
• Abstenerse de guardar alimentos en las neveras, equipos de refrigeración con sustancias contaminantes
o químicas.
• Aplicar en todo procedimiento asistencial las normas de asepsia necesarias.
• Utilizar las técnicas correctas en la realización de todo procedimiento, así minimizará el riesgo de
aerosoles, gotitas, salpicaduras o derrames.
• Realizar desinfección y limpieza a las superficies, elementos y equipos de trabajo al final de cada
procedimiento y al finalizar la jornada laboral
• Todo equipo que requiera reparación técnica, debe ser llevado a mantenimiento, previa desinfección y
limpieza. El personal de ésta área debe cumplir las normas universales de prevención y control de factor de R iesgo B iológico.
• Los recipientes para transporte de muestras deben ser de material irrompible y cierre hermético. Deben
tener preferiblemente el tapón de rosca.
• Manipular, transportar y enviar las muestras disponiéndolas en recipientes seguros, con tapa y
debidamente rotuladas, empleando gradillas limpias para su transporte. Las gradillas a su vez se transportan en recipientes herméticos de plástico o acrílico que retengan fugas o derrames accidentales, además deben ser fácilmente lavables.
• En forma permanente, se deben conservar las puertas del Laboratorio cerradas, evitar el ingreso de
personas ajenas al área; si ello ocurre éstas deben ser informadas sobre los posibles riesgos y deberán cumplir con las normas exigidas dentro del Laboratorio, igualmente se debe restringir el acceso de niños
• La ropa contaminada con sangre, líquidos corporales u otro material orgánico, debe ser enviada a la
lavandería en bolsa plástica de color roja.
• Disponer el material patógeno en bolsas resistentes de color rojo, que lo identifique con el símbolo de
riesgo biológico.
• Uso de anteojos de seguridad frontolaterales : para evitar la exposición de la conjuntiva.
• Las mujeres embarazadas que trabajan expuestas al R iesgo B iológico VIH/SIDA y/o Hepatitis B, deberán
ser estrictas en el cumplimiento de las precauciones universales y cuando el caso lo amerite, se deben reubicar en áreas de menos riesgo.
Lavado de manos clínica o logística: Realice una fricción breve y enérgica de las superficies de las manos; frote enérgicamente una palma con la otra, frote el dorso de cada mano con la palma contralateral, no olvide las regiones interdigitales. Enjuague en un chorro de agua realice esto durante 3 minutos. (anexo 2)
5.1.2 Alcohol Etílico al 70%
1. Limpieza de la piel del paciente en el área de venopunción (dejar un minuto).
1. Hipoclorito
2. Para uso industrial y hospitalario, viene el perclorito 130 a una concentración de 13% (130.000ppm). En
el Laboratorio se utilizan diferentes concentraciones en ppm. (1ppm. equivale a 1mg/l ) de acuerdo con el material a desinfectar.
3. Solución de hipoclorito: 500ppm (0.05%) por 30 minutos para material limpio, sin restos de sangre o
líquidos corporales.
4. Solución de hipoclorito 500 ppm. (0.05%) por 15 minutos para desinfección y limpieza de pisos, mesones,
baños y paredes.
5. Solución de hipoclorito 5.000 ppm. (0.5%) por 30 minutos para material contaminado con sangre, pus y
líquidos corporales.
5.1.4 Derrames en piso o mesones de trabajo:
1. Agregar al material derramado suficiente cantidad de desinfectante (hipoclorito a 5000ppm) para que lo cubra
y colocar encima unas hojas de papel periódico ó papel higiénico. Dejar actuar por 30 minutos.
2. Avisar al personal de aseo para que con la protección adecuada (utilizando guantes de caucho) retire
cuidadosamente los restos y limpie el área con hipoclorito a 500ppm y luego con agua y jabón.
5.1.5 Ruptura de material de vidrio contaminado con sangre u otro fluído corporal:
Seguir el mismo procedimiento que en el caso de derrames, teniendo la precaución de recoger los vidrios con escoba y recogedor. Nunca con las manos.
5.1.6 Derrames en centrífugas:
• Si se sospecha o se sabe que se ha roto un tubo mientras está en marcha la centrífuga, no
interrumpir la centrifugación y no abrirla hasta que haya pasado 30 minutos. Si se descubre cuando la centrífuga ha parado, se vuelve a cerrar durante 30 minutos.
• Utilizando guantes gruesos de latex y compresa impregnada en hipoclorito de sodio a 5.000 ppm,
limpiar la superficie de la centrífuga y esperar 30 minutos. Los tubos de centrífuga contaminados colocarlos en un balde con hipoclorito 5.000ppm por 30 minutos.
• Limpiar la centrífuga con solución jabonosa y enjuagar con un trapo limpio. Los tubos de la
centrífuga enjuagarlos con agua corriente y jabón.
5.1.7 Láminas y laminillas de exámenes en fresco:
3. Separar láminas y laminillas en tarro plástico o de vidrio de boca ancha rotulado " Contaminado
" con solución de hipoclorito de 5.000ppm por 30 minutos.
4. Lavar en solución jabonosa (jabón alcalino) y enjuagar con abundante agua, secar a temperatura ambiente,
horno o con trapo seco.
5.1.8 Material de plástico reutilizable (puntas, pipetas plásticas de transferencia, tubos, copillas, celdas):
3. Descarte en recipiente rotulado "Contaminado" con solución de hipoclorito 5.000ppm por 30 minutos.
4. Lave en solución jabonosa (jabón neutro) y enjuague con abundante agua y secar en el horno a una
temperatura máxima de 30°C, temperatura ambiente o manual con trapo seco.
• MANEJO MATERIAL DE DESECHO
El Laboratorio de Biomédica en cuanto a la disposición de material de desecho se acoge a lo establecido en la normatividad del manejo integral de residuos hospitalarios establecida en el decreto 2676 de 2000. Igualmente tiene en cuenta el decreto 1669 de agosto de 2002 para implantar el nuevo código de colores para la segregación de residuos y la resolución 1439 del 2002, que establece los estándares de requisitos esenciales y condiciones tecnológicas y científicas del Sistema Único de Habilitación para las Entidades Prestadoras del Servicio de Salud, en lo que se encuentran incluidos el manejo integral de residuos hospitalarios y normas de bioseguridad (Ver Manual de Prevención y Control de Infecciones Intrahospitalarias 2003, p.129/169).
• Bolsa roja grande: (calibre 5mm)
Colocada dentro de caneca grande ubicada en el área de lavado, marcada con el signo de peligro, recibe todo el material de desecho del Laboratorio. Se amarra en el momento de ser llevada a su destino final, el incinerador. No debe permanecer mucho tiempo dentro del laboratorio, su cambio se debe realizar dos veces al día.
• Bolsa Roja Mediana: (calibre 5mm)
Colocadas en canecas pequeñas en diferentes zonas del laboratorio ( toma de muestras, área de trabajo, área de lavado) para descartar el material que ha estado en contacto con el paciente, como aplicadores, algodones y material contaminado como: jeringas, frascos de muestras, frascos de reactivos, etc.. Su cambio se debe realizar mínimo dos veces en cada turno y las veces que sea necesario; su destino es la bolsa roja grande.
• Bolsa Verde Mediana: (calibre 5mm)
Colocada en canecas pequeñas (en la cafetería, tinteadero, área de citas), para descartar basura corriente. Su destino final es el basurero, con material no contaminado.
• Bolsa Gris Mediana: (calibre 5mm)
Para material reciclable como plástico, papel, cartón, vidrio y su destino final es la comercialización.
• Bolsa Violeta Mediana: (calibre 5mm): Para material radioactivo.
6.1 Material de desecho generado por el Laboratorio de Biomédica
Los desechos patógenos deben ser tratados antes de ser evacuados.
6.1.1. Agujas, lancetas y cualquier objeto cortopunzante:
Manejo:
• Colocar en recipiente plástico (guardianes) que contenga hipoclorito de sodio sodio 5.000 ppm.
Dejar actuar por 30 minutos; descartar el líquido directamente en el grifo.
• Colocar el frasco en la bolsa roja grande para enviar al incinerador.
6.1.2. Láminas con frotis coloreadas y sin colorear:
Manejo:
• Descartar en un recipiente de paredes duras y colocarlas en la bolsa roja. Evitar descartar
directamente las láminas en la bolsa roja, se puede romper.
6.1.3. Sobrenadantes de líquidos corporales centrifugados:
Manejo:
• Descartar sobre frasco de boca ancha con solución de hipoclorito 5.000 ppm o fenól 3%.
• Dejar actuar por 30 minutos y descarte en el grifo de lavado.
NORMAS BASICA DE DESEMPEÑO EN EL LABORATORIO DE BIOMEDICA
El laboratorio es un área restringida debido a que cuenta con elementos y reactivos que pueden poner en riesgo la integridad física de quienes desconocen su adecuado uso. Por esto es importante conocer las normas establecidas, familiarizarse con el uso cada uno de los materiales de trabajo para evitar cometer errores o sufrir accidentes durante su manipulación.
Normas establecidas en el desempeño de una práctica de laboratorio
• Se debe ingresar al laboratorio con la bata puesta, abotonada y limpia, siendo indispensable para
todas las prácticas el uso de guantes.
• Está prohibido comer, beber, fumar, almacenar alimentos, aplicarse cosméticos en áreas de trabajo y
recibir visitas.
• Prepárese para los procedimientos leyendo las instrucciones del manual antes de entrar al laboratorio.
Siga las instrucciones al pie de la letra, tomando todas las precauciones. Consulte cualquier anormalidad con el profeso
• Efectúe solo los procedimientos asignados por el profesor.
• Nunca pruebe las sustancias químicas o las soluciones.
• No toque las sustancias químicas con las manos a menos que se indique lo contrario.
• Utilice anteojos protectores al manejar sustancias químicas peligrosas. DE USO OBLIGATORIO EN
TODOS LOS LABORATORIOS.
• Revise cuidadosamente las etiquetas de las botellas de los reactivos antes de utilizar su contenido. Lea la
etiqueta dos veces para asegurarse que es la botella apropiada.
• Al examinar el olor de una sustancia, no coloque la cara directamente sobre el recipiente. Dirija un poco
de vapor hacia la nariz moviendo la mano sobre la superficie del recipiente.
• Nunca vuelva a verter las sustancias químicas sin utilizar en las botellas de almacenamiento. No coloque
objetos dentro de una botella de reactivo. Con excepción del gotero que esta pueda tener.
• Es indispensable en todas las prácticas de laboratorio, limpieza, exactitud, paciencia, extremada
prudencia y anotar hasta la más ligera observación.
• No corra dentro del laboratorio ni realice actividades diferentes a las programadas, no sentarse en las
mesas de trabajo.
• Mantenga el equipo y la superficie de su mesa limpios. Evite derramar, pero si esto sucede, limpie
inmediatamente con una toalla de papel.
• Lavarse las manos después de manipular material o especímenes potencialmente infecciosos, así como
al abandonar el laboratorio.
• No frote los ojos, nariz u oídos cuando las manos estén contaminadas con sustancias químicas o
biológicas.
• No introduzca pipetas en los recipientes originales de los reactivos.
• Los reactivos corrosivos o venenosos no deben pipetearse con la boca, para ello debe emplearse un
pipeteador de seguridad.
• Sofoque cualquier indicio de incendio con una toalla. Asegúrese de conocer la localización del extinguidor
de incendios en el laboratorio. No emplee agua cuando el líquido inflamado sea soluble en ésta.
• Informe sobre cualquier accidente al profesor.
Fuente: Manual de Bioseguridad para los desechos biológicos del laboratorio clínico Hospital San José de Bogotá.
NORMAS DE BIOSEGURIAD
Durante las prácticas de laboratorios es importante tener presente que tipo de residuos se generan y cual es el destino de los mismos. Tenga en cuenta la siguiente tabla y siga con atención las indicaciones para cada práctica:
TIPO DE RESIDUO DESTINO
Guantes de latex usados Caneca con bolsa roja Toallas de papel después del secado de manos Caneca con bolsa verde Toallas de papel contaminadas con líquidos biológicos Caneca con bolsa roja Gorro desechable Caneca con bolsa roja Agujas venojet usadas Guardian Capuchón verde de aguja venojet Bolsa gris Algodón contaminado con sangre Caneca con bolsa roja Lancetas Guardian Tubos de ensayo con sueros y/o sangre total de pacientes
Dejar en gradillas
Láminas y laminillas contaminadas Bandejas marcadas como “descartar laminas y laminillas” Solución reacción (reactivo+ muestra) Recipiente marcado como “solución de reacciones” Cubetas de espectrofotómetro contaminadas Descartar en recipiente marcado como” cubetas contaminadas” Puntas amarillas y azules contaminadas Recipientes marcados como “Descartador de puntas”
• Líquido de Turk contaminado Ácido
acético glacial 3.0 ml
• Agua destilada 100 ml
• 1 o 2 gotas de azul de metileno
Recipiente marcado “Turk + sangre”
Capilares para hematocrito con sangre total Recipiente o tarro marcado como biosanitario
3. MARCO TEORICO
Resolver las siguientes preguntas guiadas para el quiz
3.1 Cinética enzimática:
• Enumerar los factores que afectan las reacciones enzimáticas.
• ¿Cuándo se lleva a cabo una reacción en cinética de orden cero?
• ¿Por qué un método conveniente para la cuantificación de enzimas es la medición de la actividad catalítica?
• ¿Con respecto a la unidad en que se expresa la actividad de una enzima, qué es la Unidad Internacional (UI)?
• ¿Cuál es la unidad de actividad enzimática reconocida por el SI? ¿Qué expresa?
3.2 Enzimas de importancia clínic a:
• Elaborar las curvas de actividad versus tiempo para marcadores bioquímicos (CK- total, CK-MB, LDH) de
infarto agudo de miocardio.
• ¿Qué características importantes tiene la CK macro y la CK mitocondrial (CK-Mi)? ¿Cómo influyen en la
medición de la isoenzima CK. MB?
• De acuerdo a la teoría propuesta para las enzimas CK, CK-MB explicar las fuentes de tejido, importancia
diagnóstica e intervalos de referencia para la enzima LDH.
• Qué es la troponina, qué importancia diagnóstica tiene para el IAM?
• ¿Qué otras pruebas clínicas se están implementado para el diagnóstico de síndrome coronario?
3.2.1. Cinasa de creatina ó creatincinasa (CK)
• Otros nombres : creatinfosfocinasa ó fosfocinasa de creatina (CPK) ó isoenzimas de CK /CPK.
• Función:
PM: aprox. 82000 daltons. Su función fisiológica está asociada con la generación de adenosina trifosfato (ATP) para sistemas contráctiles, de transporte y muchas otras vías metabólicas. La creatinfosfocinasa es principalmente una enzima intracelular, principalmente de las células musculares, donde participa en el almacenaje de fosfato de creatina de alta energía. Todo ciclo de contracción del músculo origina el uso de fosfato de creatina, con producción de ATP. Esto da como resultado concentraciones relativamente constantes de ATP de músculo. La reacción reversible catalizada por CK es:
+ ATP + ADP
Creatina fosfato de creatina
La reacción es dependiente del pH y, si este es neutro (6.8) se favorece la formación de ATP. El pH 9 es óptimo para la formación de fosfocreatina, el compuesto de alta energía. Durante la contracción muscular activa, la CK citoplasmática cataliza la reacción inversa, facilitando así a los miocitos una fuente inmediata de ATP.
• Fuente de tejido:
La CK está distribuida de forma amplia en el tejido, con actividades más altas en el músculo esquelético, cardíaco y cerebral. La CK está presente en cantidades mucho más pequeñas en otras fuentes de tejido, como vejiga, placenta, tubo digestivo, tiroides, útero, riñón, pulmones, próstata, bazo, hígado y páncreas.
• Importancia diagnóstica
Las concentraciones de CK suelen elevarse en trastornos de músculo cardíaco y esquelético. Por lo cual se considera que la CK es un indicador sensible de IAM (Infarto Agudo de Miocardio) y distrofia muscular en particular tipo Duchenne, alcanzando en esta última 50 a 100 veces el límite superior normal. A pesar de esta sensibilidad no son del todo específicas, ya que el aumento en la concentración de CK se halla en otras anormalidades de músculo cardíaco y muscular. CK altas se han observado ocasionalmente en trastornos del SNC, hipotiroidismo, hiperexia maligna y síndrome de Reyé. Debido a lo anterior, la separación de la CK total en sus distintas fracciones de isoenzima se considera un indicador más específico.
La CK citoplasmática consiste en combinaciones quiméricas de dos subunidades M (de músculo) y B (de cerebro). Esto permite la conformación de tres isoenzimas posibles MM ó CK3, MB ó CK2. y BB ó CK1. Además, modificaciones post-traduccionales de las isoenzimas van a producir tres isoformas MM y dos isoformas MB. Cada una de estas formas tienen un peso molecular de aproximadamente 80 Kd.
La CK-MM es la isoenzima que conforma casi todas las enzimas séricas en el individuo sano.
• El músculo esquelético contiene principalmente MM (99%)
• El músculo cardíaco, MM (77%) y MB (20%)
• El tejido cerebral CK- BB (92%),
• Colon e ileón (CK- BB 96%).
EL nivel normal de CK es prácticamente 100% de isoenzima de MM. Cuando se produce una lesión del SNC, se eleva la BB, lo que se traduce en un ligero aumento de la CK total. Los estudios de las isoenzimas ayudan a distinguir si la CK se origina del corazón (MB) o del músculo esquelético (MM). 2
ISOENZIMAS DE CK (LOCALIZACION DEL TEJIDO Y FUENTES DE AUMENTO DE CONCENTRACION ) ISOENZIMA TEJIDOS CONDICION CK-MM Corazón Músculo esquelético
IAM Trastorno del músculo esquelético, distrofia muscular, poliomiositis, hipotiroidismo, hipertermia maligna, actividad física (depende de la condición), inyección intramuscular CK - MB Corazón Músculo esquelético
IAM (cc > 6% de la CK total) Lesión miocárdica, isquemia, angina, enfermedad cardíaca inflamatoria, cirugía cardíaca, ditrofia muscular Duchenne, poliomiosits, hipertermia maligana, fiebre exantemática, envenenamiento por monóxido de carbono CK- BB Cerebro, vejiga, pulmón, próstata, útero, colon, estómago, tiroides
Choque del SNC, encefalopatía anóxica, ACV, convulsión, traumatismo placentario o uterino, carcinoma, Sdme Reyé, envenenamiento por monóxido de carbono, hipertermia maligna, IRA, IRC.
• Intervalos de referencia
CK total:
• Hombres: 15 a 105 U/L (30°C)
• Mujeres: 10 a 80 U/L (30°C)
Glucosa-6-fosfato + NADP +G6P-DH 6-fosfogluconato + NADPH + H +
Esta reacción es monitoreada por el aumento en la absorbancia a medida que se genera NADH a 340nm. 3
Procedimiento:
• Precalentar el reactivo de trabajo (Temperatura de reacción 30ºC)
• Pipetear en una cubeta 50 μl de muestra y adicionar 1 ml del reactivo de trabajo.
• Mezclar e insertar la cubeta en el espectrofotómetro
• Poner el cronómetro en marcha
• Después de 3 minutos registrar la absorbancia inicial y a intervalos de un minuto hasta por 3 minutos.
• Resultados:
• minuto 3 Absorbancia 1 ó inicial= ,
• minuto 4 Absorbancia 2 =
• minuto 5 Absorbancia 3 =
• minuto 6 Absorbancia 4 =.
• Cálculos:
• Calcular el incremento de la absorbancia por minuto promedio (ΔA/min.) y multiplicar por 3333= U/L como
sigue: A 2 – A 1 = A 3 - A 2 = A 4 - A 3 = _________
∑÷ 3 = ___________ x3333 U/L = ___________
5.2.2 Medida de la isoenzima CK-MB
Existen métodos analíticos usados para el análisis de isoenzimas de CK, incluyendo cromatografía de intercambio iónico, electroforesis, inmunoinhibición, radioinmunoensayo e inmunoensayo de enzimas. Las isoenzimas son fáciles de diferenciar electroforéticamente dado que a pH 8.6, la isoenzima MM permanece en el origen mientras que la forma BB avanza hacia el ánodo con una movilidad comparable a la de la albúmina. La isoenzima MB se sitúa en el medio de estas dos. Con los inmunoensayos se detecta CK-MB de manera confiable con reactividad cruzada mínima. 2
Inmunoinhibición: Un anticuerpo inhibe las dos subunidades M de la CK-MM (CK-3) y la única subunidad M de la CK-MB (CK-2), lo que permite la medición de la subunidad B de la CK-MB (asumiendo la ausencia de CK-BB ó CK-1). La concentración catalítica de CK-B, que corresponde a la mitad de la actividad de CK- MB, se determina empleando las reacciones acopladas de la hexoquinasa (HK) y glucosa 6 fosfato (G6P-DH) a partir de la velocidad de formación del NADPH medido a 340 nm. 3
Creatina fosfato + ADP CK-B Creatina + ATP ATP + Glucosa HK glucosa-6-fosfato + ATP Glucosa-6-fosfato + NADP+^ G6P-DH 6-fosfogluconato + NADPH + H+ Procedimiento:
- Llevar el espectrofotómetro a 340 nm
• Precalentar el reactivo de trabajo (Temperatura de reacción 30ºC)
• Pipetear en un tubo de ensayo 40 μl de muestra y adicionar 1 ml del reactivo de trabajo.
• Mezclar bien e incubar inmediatamente a 37ºC(baño serológico)
• Poner el cronómetro en marcha
• Leer la absorbancia a 340 nm exactamente a los 5 minutos (A 5 ) y a los 10 minutos (A 10 ) de incubación.
- Cálculo: Medida a 340 nm: CK-MB (U/L)= A 10 - A 5 x 1651= U/L
- El índice de CK-MB se calcula utilizando la siguiente fórmula:
CK-MB concentración x 100 = %
CK total concentración
- Interpretación de los resultados: Se tiene la probabilidad de daño de miocardio si se cumplen simultáneamente las siguientes condiciones:
• La actividad de CK total excede los siguientes rangos normales:
• Hombres: 15 a 105 U/L (30°C)
• Mujeres: 10 a 80 U/L (30°C)
Si se sospecha de daño de miocardio y los valores se encuentran por debajo del rango normal, existe la posibilidad de un infarto reciente. En este caso debe repetirse la determinación luego de 4 horas.
• La actividad de CK- MB excede los valores de referencia.
• El porcentaje de CK- MB se encuentra entre el 6-20% del valor de CK total. Si el porcentaje es menor al
6% es probable que haya daño de músculo esquelético. Si el porcentaje supera el 20% del valor total de CK se puede sospechar de la presencia de una forma macro de CK (atípica) que no es inhibida por los anticuerpos anti CK-M.
5.2.4Medida de la actividad de la LDH
La lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la reducción del piruvato por NADH, obteniéndose lactato y NAD +. La concentración catalítica se determina a partir de la velocidad de desaparición del NADH, medido a 340 nm 3
LDH Piruvato + NADH + H +^ → Lactato + NAD+
Procedimiento:
- Precalentar el reactivo de trabajo (Temperatura de reacción 30 - 37ºC)
- Pipetear en una cubeta20μl de muestray adicionar 1 ml de reactivo de trabajo
- Mezclar e insertar en el espectrofotómetro a 340 nm
- Poner el cronómetro en marcha
- Pasados30segundos, anotar la absorbancia inicial y efectuar nuevas lecturas cada minuto durante 3 minutos.
• Resultados:
• 30 segundos Absorbancia 1 ó inicial= ,
• minuto 1´30 Absorbancia 2 =
• minuto 2´30 Absorbancia 3 =
• minuto 3´30 Absorbancia 4 =.
• Cálculos: Calcular la diferencia entre absorbancias consecutivas y el promedio de la diferencia de
absorbancia por minuto. ΔA/min x 8095=U/L
A 1 – A 2 =
A 2 - A 3 =
A 3 - A 4 = _________
∑÷ 3 = ___________ x 8095 U/L = ___________
5.3 Fase post analítica
• Correlacionar los resultados con los valores de referencias y las condiciones del paciente. Comparar los
resultados obtenidos con los intervalos de referencia investigados y los proporcionados por la casa comercial en sus estuches.
- Detectar errores durante la medición y si los resultados no muestran concordancia con el paciente, y si es necesario repetir las determinaciones. - Entregar un informe escrito a mano el jueves siguiente a la práctica
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