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Universidad Santa María
Núcleo oriente
Laboratorio de Bioquímica I.
Facultad de Farmacia
5to semestre
Bachiller:
Jossan Dakduk
C.I V-28.499.
Docente: Dra. Millán, Luz
OBJETIVO GENERAL
Realizar pruebas de identificación de lípidos y grasas.
Así como algunas principales reacciones de las grasas.
Alcohol etílico. Cloroformo. Tetracloruro de carbono. Benceno. Alcohol metílico. Éter . Acetona . Cloruro de Sodio saturado. Solución alcohólica. Colorante Sudán III. Tinta roja. Muestra problema. Aceite vegetal. Aceite de Oliva. Huevo .
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Tomar 5 tubos de ensayo. Coloque en cada tubo de ensayo 0,5 mL de aceite o grasa. Añadir 2 mL de las sustancias indicadas arriba (una sustancia diferente para cada tubo). Éter. Cloroformo. Alcohol. Acetona. Agua. Realice la experiencia en frío y caliente. A partir de la yema del huevo. Separar con mucho cuidado la yema de la clara. (previamente cocida). Colocar 2 gramos de la yema en un vaso de precipitado. Añadir 2 ml de alcohol metílico y 2 ml de éter. Colocar la muestra en un matraz, taparlo y agitarlo por 1 minuto. Dejar reposar la mezcla por 10 minutos y después filtrar (usar papel filtro). Pesar los lípidos totales. Lavar el residuo con^ 2 ml^ de la solución de éter – etanol.
Preparar en un vaso de precipitado 20 mL de la solución problema. Añadir 10 mL de solución de Hidróxido de sodio 20%. Calentar a baño maría de 15 a 30 minutos hasta que haya sido totalmente saponificada (apariencia de clara uniforme). Observar y agregar Cloruro de Sodio saturado. Observar si el precipitado se aglomera en reposo. 20 mL 10 mL Aparición de saponificación. Formación del precipitado. Disponer en una gradilla con tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de diferentes aceites. Añadir a uno de los tubos 4- gotas de solución alcohólica de Sudán III. A los otros tubos añadir 4- gotas de tinta roja. Observar los resultados: en el tubo con Sudan III todo el aceite tiene que aparecer teñido, mientras que, en el tubo con tinta, esta se irá al fondo y el aceite no estará teñido. Agitar ambos tubos y dejar reposar. Reposo (^) Sudan III Tinta roja
Para esteroles insaturados
Ensayo colorimétrico Tomar 2 mL del sobrenadante de la prueba. Obtención de lípidos a partir de la yema del huevo. 2 mL Colocar en un tubo de ensayo y añada 10 gotas de anhídrido acético. Finalmente añadir 2 gotas de ácido sulfúrico. Observar los cambios
ÁCIDO SULFÚRICO (98%) COLESTEROL
Tomar 2 mL del sobrenadante de la prueba. Obtención de lípidos a partir de la yema del huevo. 2 mL En un tubo de ensayo inclinado añada la misma cantidad de ácido sulfúrico concentrado que se deslice por la pared del tubo. En la interfase aparece un anillo coloreado y agitando se observa la disolución clorofórmica. Observar los cambios. Anillo coloreado Interfase Agitación Disolución
