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MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS EN LA IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS
Agar Mac Conkey Método de siembra Antes de inocular Después de inocular RESULTADOS Estriado en superficie Siembra: Inocular directamente la muestra por estría. Incubación: En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-28 horas. Microorganismos fermentadores de lactosa (+) Si aparecen colonias rosadas- rojizas (puede observarse halo de precipitación biliar). (-) Si aparecen colonias incoloras (del mismo color que el medio). Agar EMB (eosina azul de metileno, por sus siglas en inglés) o Levine Método de siembra Antes de inocular Después de inocular Microorganismos
fermentadores de lactosa y / o sacarosa : Estriado en superficie Siembra: directa, estriando la superficie del medio de cultivo. Incubación: en aerobiosis, a 35-37ºC durante 18- hs. (+) Colonias de color negro azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico. (-) Colonias del color del medio, incoloras.
Método de siembra Antes de inocular Después de inocular Fermentación de azúcares Punción y estriado Siembra: a partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, con aguja de inoculación inocular el medio de cultivo, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del mismo. Incubación: en aerobiosis,
(+) Pico de flauta alcalino (rojo) / profundidad Ácida (amarillo). Hay fermentación de glucosa, pero no de lactosa ni sacarosa. (+) Pico de flauta ácido (amarillo) / profundidad ácida (amarillo). Hay fermentación de azúcares glucosa, sacarosa y lactosa. (-) Pico de flauta alcalino (rojo) / profundidad alcalina (rojo). No hay fermentación de azúcares.
35-37ºC durante 18-24hs. (-) Producción de gas (+) (-) (+) Aparición de burbujas, fragmentación del medio o elevación del mismo separándose del fondo del tubo. (-) No hay aparición de burbujas, fragmentación del medio o elevación del mismo separándose del fondo del tubo.
Método de siembra Antes de inocular Después de inocular Sulfuro: Siembra por punción Siembra: Por punción profunda utilizando una aguja de inoculación recta. Inocular el centro del tubo, y la punción debe abarcar 2 tercios de la profundidad del medio de cultivo desde la superficie. (+) Ennegrecimiento del medio en la zona de crecimiento. Se forma sulfuro ferroso negro insoluble. (-) No se observa ennegrecimiento.
Incubación:en aerobiosis, 35-37ºC durante 18-24hs. Pruebas bioquímicas: ● Prueba de indol: Agregar al medio de cultivo 3 o 5 gotas de Indol Reactivo Indol: bacteria tiene la enzima triptofanasa. (+) Presencia de color rojo fucsia brillante.
Agar Citrato de Simmons Método de siembra Antes de inocular Después de inocular Utiliza Citrato como fuente de carbono Estriado con asa en ojal Siembra: Estriar la superficie del medio de cultivo. Incubación: (+) Se verifica crecimiento con el consiguiente cambio de color (de verde vira a azul). (-) Hay ausencia de desarrollo bacteriano, el medio conserva el color verde original.
En aerobiosis, a 35-37 °C, durante 24-72 horas. Algunos microorganismos pueden requerir hasta 7 días de incubación. MR/VP: ROJO DE METILO (MR)- VOGES- PROSKAUER (VP) Método de siembra Antes de inocular Después de inocular Rojo de metilo: producción ácidos fuertes a partir de hidratos de carbono Inoculación con asa en ojal (+) Se observa la presencia de color rojo estable en la superficie del caldo. Si se agita el tubo, se podrá observar un color uniforme (2° imagen). (-) El agregado del indicador no produce coloración roja.
del medio. ● Prueba del Voges Proskauer: añadir 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etílico absoluto y 0,2 ml de hidróxido de potasio al 40% a 2,5 ml de cultivo. Agitar vigorosamente el tubo, y dejar a temperatura ambiente durante 10-15 minutos. Observar el color de la superficie del medio. Prueba VP: producción de acetona (+) La aparición de color rojo en la superficie del medio luego de una vigorosa agitación y posterior reposo durante unos pocos minutos. La bacteria produce acetona como producto principal del metabolismo de la glucosa y menores cantidades de ácidos mixtos. El color se observa en la superficie por la reacción con el oxígeno atmosférico. (-) No aparece color rojo en la superficie del medio al cabo de 15 minutos de reposo.
Ureasa (Agar urea de Christensen) Método de siembra Antes de inocular Después de inocular Hidrolizan la urea
Fenilalanina dasaminasa (Agar Fenilalanina) Método de siembra (+) Desarrollo de color verde pálido a intenso en el pico de flauta y en el líquido de condensación. (-) Sin cambios de Estriado con asa en ojal
Siembra: A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar un inóculo denso estriando la superficie del medio. Incubación: En aerobiosis, a 35-37 °C, durante 24 horas. Procedimiento para interpretar resultados: Agregar 4 a 5 gotas de Fenilalanina Reactivo. Rotar el reactivo con suavidad sobre el pico de flauta. Observar el color dentro de los primeros 5 minutos. color. El medio permanece amarillo debido al color del reactivo.
