Técnica de la PCR: Introducción y principios básicos, Diapositivas de Genómica

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PCR

I N G R I D C H I , V A L E N T I N A M U G A R T E , A N A G A R C Í A , V A L E R I A G Ó M E Z

R E A C C I Ó N E N C A D E N A D E L A P O L I M E R A S A

F U N D A M E N T O S E I N T R O D U C C I Ó N

Desarrollada en 1983 por Kary Mullis.

0 1 Reacción en cadena de la polimerasa

Su objetivo es generar millones de copias de una

muestra particular de ADN, para ello se utiliza la

actividad de la enzima ADN polimerasa que

sintetiza naturalmente el ADN en las células.

ADN genómico - PCR.

ADNc - RT-PCR.

ADN genómico - qPCR.

Algunos tipos de PCR

Basada en la capacidad de replicación del ADN.

de Dios L T, Ibarra C, Velasquillo C. Fundamentos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y de la PCR en tiempo

real [Internet]. Medigraphic.com. [citado el 16 de marzo de 2024]. Disponible en:

https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2013/ir132d.pdf

https://www.google.com/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fwww.iaea.org%2Fes%2Fnewscenter%2Fnews%2Fpcr-en-tiempo-real-covid-19&psig=AOvVaw1pRvG-

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https://www.google.com/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fwww.uchile.cl%2Fnoticias%2F165397%2Fconoce-que-es-el-examen-de-pcr-y-que-dificultades-implica-

&psig=AOvVaw1pRvG-

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P C R C O N V E N C I O N A L Steps of PCR and Essential PCR Components [Internet]. Disponible en: https://www.sigmaaldrich.com/MX/es/technical- documents/protocol/genomics/pcr/standard-pcr Referencias

Técnica que permite amplificar secuencias específicas de ADN. Desarrollada por Kary Mullis en 1983. 0 3 On Science. La PCR y su peculiar inventor [Internet]. On Science. 2021. Disponible en: https://onscience.es/como-se-invento-la-pcr-polimerasa/ P C R C O N V E N C I O N A L

Desnaturalización. Apareamiento de cebadores. Elongación. Tres pasos principales 0 4 Labbox. LA TÉCNICA DE LA PCR (INTRODUCCIÓN y PRINCIPIOS BÁSICOS) [Internet]. Labbox España. 2022. Disponible en: https://esp.labbox.com/la-tecnica-de-la-pcr-introduccion-y-principios-basicos/ P C R C O N V E N C I O N A L

Tubos de reacción Racks para tubos Pipetas Termociclador Microcentrífuga ADN molde Cebadores ADNpolimerasa termoestable Nucleótidos trifosfato (dNTPs) Buffer de reacción Agua R E A C T I V O S P C R C O N V E N C I O N A L 0 5 M A T E R I A L E S

Apareamiento de cebadores. SEGUNDO PASO 0 7 Labbox. LA TÉCNICA DE LA PCR (INTRODUCCIÓN y PRINCIPIOS BÁSICOS) [Internet]. Labbox España. 2022. Disponible en: https://esp.labbox.com/la-tecnica-de-la- pcr-introduccion-y-principios-basicos/

P C R C O N V E N C I O N A L

Elongación. 0 8 Labbox. LA TÉCNICA DE LA PCR (INTRODUCCIÓN y PRINCIPIOS BÁSICOS) [Internet]. Labbox España. 2022. Disponible en: https://esp.labbox.com/la-tecnica-de-la- pcr-introduccion-y-principios-basicos/ TERCER PASO Síntesis nuevas cadenas (20-40 ciclos)

P C R C O N V E N C I O N A L

D E R I V A C I O N E S

1 0 P C R F O R W A R D ( P C R H A C I A A D E L A N T E ) Mismo ciclo de PCR convencional, donde se amplifica el ADN en la dirección de la cadena codificante de la secuencia de ADN objetivo. P C R R E V E R S E ( P C R I N V E R S A ) Se amplifica el ADN en la dirección opuesta de la cadena molde. Síntesis de ADN complementario (cDNA) a partir de ARN. P C R C O N V E N C I O N A L

1**. **Diagnóstico Médico**** : Detección de enfermedades genéticas, infecciones virales, bacterianas y fúngicas, así como para el monitoreo de la carga viral en pacientes con VIH y otras enfermedades virales. Aplicaciones 1 1 Aldariz IF. PCR: qué es y en qué consiste el PCR test o examen PCR del COVID19 [Internet]. Greenteach. 2021. Disponible en: https://www.greenteach.es/pcr-que-es-en-que-consiste-pcr- test-examen-covid19/ P C R C O N V E N C I O N A L

**2. **Investigación Genética**** : Es fundamental en la secuenciación de ADN, la identificación de variantes genéticas, la caracterización de genes y la clonación de ADN. 1 2 Aldariz IF. PCR: qué es y en qué consiste el PCR test o examen PCR del COVID19 [Internet]. Greenteach. 2021. Disponible en: https://www.greenteach.es/pcr- que-es-en-que-consiste-pcr-test-examen-covid19/ P C R C O N V E N C I O N A L Aplicaciones

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• Sensibilidad : Capaz de detectar cantidades mínimas de ADN.
• Especificidad: Puede amplificar secuencias específicas de ADN.
• Rapidez: Permite la amplificación de ADN en cuestión de horas.
• Versatilidad : Se puede adaptar a una variedad de aplicaciones. P C R C O N V E N C I O N A L Ventajas

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• Sensibilidad a contaminaciones: Las pequeñas cantidades de ADN contaminante puede generar resultados falsos positivos.
• Limitaciones en el tamaño del fragmento : La longitud del fragmento de ADN amplificado está limitada por la eficiencia de la ADN polimerasa y otros factores.
• Necesidad de secuencia conocida: Se requiere conocer las secuencias flanqueantes para diseñar cebadores específicos. Desventajas P C R C O N V E N C I O N A L