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Proyecto donde se describen las bases de la tinción de Gram así como algunos de los puntos y características más importantes.
Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones
Oferta a tiempo limitado
Subido el 20/01/2022
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M I C R O B I O L O G Í A I S E P T I E M B R E , 2 0 2 1 T I N C I Ó N D E G R A M
Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared celular de las bacterias, la cual le otorga propiedades determinantes a cada microorganismo. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célula gram- negativa contiene únicamente una capa delgada de peptidoglicano lo que representa un 10-20% de la composición total de la pared celular, dicha pared está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. La pared de la célula gram-positiva, por otro lado, es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano (80-90%) así como algo de ácido teicoico. (Figura 1). Así pues, la composición química y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas explica y determina las características tintoriales. La tinción de Gram está definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas. Dicha tinción debe su nombre a que fue desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram en 1884.
J A C Q U E L I N E Q U I R O Z Z A V A L A , C Ó D I G O : 2 2 0 8 3 1 0 1 4 D O C E N T E : R A M Ó N I G N A C I O A R T E A G A G A R I B A Y
Otras diferencias significativas entre ambos grupos de bacterias son que mientras que las bacterias gramnegativos son constantes en su reacción, los microorganismos Gram positivos pueden presentar respuestas variables en ciertas condiciones (son Gram lábiles). Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias Gram positivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y en consecuencia, se tiñen por la safranina apareciendo como Gram negativas. Análogo efecto se produce en ocasiones por cambio en el medio del organismo, o por ligeras modificaciones en la ejecución de la técnica. Por este motivo, es preciso atenerse, en la práctica, al procedimiento establecido. P A R E D C E L U L A R D E L A S B A C T E R I A S G R A M N E G A T I V A S Y G R A M P O S I T I V A S
La estructura de la pared celular de la bacteria determina qué tinte es visible al final del procedimiento. Las bacterias gram-positivas tienen una gruesa pared de peptidoglucano, que atrapa las moléculas voluminosas de violeta y yodo. (El tinte rojo también se une, pero el cristal violeta lo cubre). En cambio, las bacterias gram-negativas tienen una delgada pared de peptidoglucano y una membrana externa adicional (ver la imagen siguiente). La delgada pared de peptidoglucano solo retiene el tinte rojo, lo que le da un tono rosado a las bacterias gram- negativas.
Portaobjetos Asas bacteriológicas Mechero placas de un cultivo de 24h de edad de microorganismos Gram+ y Gram- Puente de tinción Microscopio
Colorante Cristal Violeta Solución alcohol-acetona Lugol Safranina Agua estéril Aceite de inmersión
En el portaobjetos limpio y sin grasa, colocar una gota de agua destilada estéril. Esterilizar el asa y tomar una muy pequeña cantidad del cultivo. Colocar la muestra en la gota de agua y se extiende en un espacio de un cm2 hasta la sequedad total. Tomar la laminilla y fijar el material biológico pasándolo tres veces por la flama.
Cubrir la laminilla con cristal violeta por un minuto. Lavar con agua de la llave. No secar. Agregar lugol por un minuto Pasado el tiempo, lavar con agua de la llave. No secar. Inclinar la laminilla y agregarle la solución alcohol-acetona, para lavar los colorantes y el lugol. Lavar con agua de la llave. No secar. Cubrir la laminilla un minuto con safranina. Después de este tiempo, lavar la laminilla con agua de la llave hasta retirar el exceso de safranina. Enjuagar el portaobjetos con agua destilada estéril. Secar la laminilla al aire libre. Ya seca se le agrega una gota de aceite de inmersión y se observa en el microscopio utilizando el objetivo 100x.
R E F E R E N C I A S B I B L I O G R Á F I C A S Khan Academy. (2013, febrero). La estructura de los procariontes (artículo). Recuperado el 01 de septiembre de 2021 de https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene- expression-and-regulation/dna-and-rna-structure/a/prokaryote-structure Rodríguez, F. (2017, 4 agosto). Tinción de Gram. Blog de Laboratorio Clínico y Biomédico. Recuperado el 01 de septiembre de 2021 de https://www.franrzmn.com/tincion-de-gram/ Murray PR y Col: Microbiología Médica. 8a Edición. Editorial Elsevier Mosby. 2017. U N I V E R S I D A D D E G U A D A L A J A R A C E N T R O U N I V E R S I T A R I O D E L O S A L T O S C A R R E R A M É D I C O C I R U J A N O Y P A R T E R O