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Una práctica de microbiología general sobre el uso del microscopio y la técnica de tinción simple. Se explica la importancia del microscopio en la observación de microorganismos, los diferentes tipos de microscopios, los objetivos de la preparación de frotis y los principios de las tinciones simples. Se detallan los procedimientos para realizar tinciones simples en muestras de excremento de infante, exudado faríngeo y agua de estanque. El documento proporciona información valiosa sobre los conceptos y técnicas fundamentales en microbiología, lo que lo hace útil para estudiantes de carreras relacionadas con la biología y la salud.
Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones
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El éxito de la mayoría de los procedimientos de tinción depende de una buena preparación del frotis. Hay varios objetivos para la preparación de exámenes. La primera es hacer que las células se adhieran al portaobjetos para que no puedan eliminarse durante la tinción y el lavado posteriores. Otro objetivo es garantizar que no se produzca una contracción celular durante la tinción; de lo contrario, pueden producirse distorsiones y artefactos. Finalmente, el tercer objetivo es preparar un frotis fino, porque su espesor determina la facilidad de visualización de las células individuales, su agrupación o detalles de la estructura celular. Tinción simple La mayoría de las tinciones en microbiología utilizan colorantes de anilina sintética derivados del benceno. Un colorante es usualmente una sal, aunque algunos son ácidos o bases, compuesta de iones coloreados cargados. El ion coloreado es referido como un cromóforo, por ejemplo: Cloruro de azul de metileno Azul de metileno
Cromóforo Si el cromóforo es un ion positivo, como el azul de metileno, se considera un colorante básico; si el ion es negativo, entonces es un colorante ácido. La mayoría de las bacterias son teñidas cuando un colorante básico atraviesa su pared celular y se adhiere a la misma con uniones iónicas débiles, debido a su carga negativa. El azul de metileno, fucsina básica y el cristal violeta son ejemplos de colorantes básicos usados comúnmente en las tinciones simples. La tinta china, nigrosina y la eosina son considerados colorantes ácidos, los cuales no tiñen a la bacteria debido a las fuerzas de repulsión electrostáticas entre la carga del colorante y la superficie celular. Los procedimientos de tinción que emplean un colorante se denominan tinciones simples. Cuando el colorante tiñe a la célula se le llama tinción directa o positiva. En tanto, si se colorea solamente el medio que la rodea es una tinción indirecta o negativa. En ésta, la célula aparecerá solamente como un objeto transparente contra un medio coloreado. En la tinción negativa, las células no suelen fijarse con calor o químicos, por lo que las bacterias presentan menor distorsión y puede apreciarse su tamaño y forma natural. Por tanto, es posible observar bacterias que son difíciles de teñir como los espirilos. En ocasiones, puede combinarse con la tinción positiva para observar estructuras como las cápsulas. En este caso, la cápsula será vista como un halo que rodea una célula teñida contra un medio oscuro. Las tinciones simples pueden usarse para determinar la morfología, tamaño y agrupación celular.
Identificar las partes del microscopio, así como su manera de uso para desarrollar técnicas de manejo y control. Ver objetivos y manejo de la técnica de tinción simple.
