Controle
Controle
Microbiológico nas
Microbiológico nas
Usinas de açúcar e
Usinas de açúcar e
álcool
álcool
Prof.ª Drª
Prof.ª Drª Dejanira
Dejanira de Franceschi de Angelis
de Franceschi de Angelis
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Controle microbiológico nas usinas de açucar e álcool, Notas de estudo de Biomedicina
Controle microbiológico nas usinas de açucar e álcool
Tipologia: Notas de estudo
2010
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Compartilhado em 11/09/2010
ricardo-sousa-15 🇧🇷
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ControleControle
Microbiológico nasMicrobiológico nas
Usinas de açúcar eUsinas de açúcar e
álcoolálcool
Prof.ª Drª^ Prof.ª Drª
DejaniraDejanira
de Franceschi de Angelisde Franceschi de Angelis
1. OBJETIVO O
controle
do
crescimento
da
população
microbiana dentro de um complexo industrial deaçúcar
e
álcool
objetiva
essencialmente
a
diminuição
das
perdas
de
matéria-prima
e,
conseqüentemente,
alcançar
melhores
rendimentos econômicos.
Caldo antes da sulfitaçãoou calagem
- nºbactérias/mL• Plaqueamento para produtores degoma e ácido
Caldo decantado
- nºbactérias/mL• Plaqueamento para produtores degoma e ácido• Redução de resazurina
Mosto e MelXarope, água dediluição, caldo cru
- nºbactérias/mL• Redução de resazurina• Plaqueamento para produtores degoma e ácido
Mosto antes e após ostrocadores de calor
- Redução de resazurina• Plaqueamento para produtores degoma e ácido
Início de alimentação dadorna Final da alimentação
- nºbactérias/mL • nº de células vivas/mL • % de viabilidade • % de brotamento • % de brotos vivos • Plaqueamento
Leite de leveduras ou cubas
- nºbactérias/mL • % de células vivas • % de brotamento • % de brotos vivos • plaqueamento
Quando
as
análises
são
para
microbiologia,
os
frascos são de 200, 300 a 500 mL. As amostraspreferencialmente devem ser amostras mistas oucompostas. Uma vez coletadas as amostras, os frascos devemser fechados e guardados sob refrigeração de 5 ±2ºC, pelo menor tempo possível. Dependendo daamostra
é^
conveniente
anotar
no
momento
da
coleta a temperatura e o pH.
4. AVALIAÇÃO DO NÚMERO DE BACTÉRIAS^ A
avaliação
pode
ser
feita
pelos
seguintes
métodos principais:
MICROSCÓPICA
PLAQUEAMENTO
FISIOLÓGICA
PLAQUEAMENTO O plaqueamento embora não forneça o resultadoimediato
pode
garantir
a^
viabilidade
dos
microrganismos presentes além de poder avaliar apresença de microrganismos em volumes maiores.
FISIOLÓGICA O método de resazurina permite avaliar de formarelativa a presença de atividade microbiana emfunção da mudança de cor no corante. A
produção
de
ácido
pode
ser
avaliada
e
comprovada
mediante
medida
do
pH,
ou
com
aplicação de corantes como indicadores. Quanto à produção de goma, que é o resultado dapolimerização
de
açúcares
simples
glicose
e
frutose que formam respectivamente dextrana elevana.
Preparar
tubos
com
mL
de
solução
de
resazurina,
tampar
com
algodão,
autoclavar
minutos a 121ºC. 9
Nos tubos com resazurina, adicionar 1 mL da amostra.
Incubar
em
estufa
ou
banho-maria
a
37ºC. 9
Anotar as mudanças de cor a cada 30 minutos (violeta-róseo-incolor),
estão
em
relação
direta
com a atividade microbiana.
Modificação da cor
(horas)
Avaliaçãoda infecção
Tratamento
violeta
róseo
incolor
-^
alta
imediato
alta
imediato
média
imediato
fraca
normal
-^
desprezível
preventivo
Preparo do Material:^ Placas de petri e pipetas devem ser esterilizadasembrulhadas em papel ou em recipientes próprios.^ A solução salina (NaCl a 0,85%) é colocada novolume de 9 mL em tubos. A seguir tampa-se comalgodão e esteriliza-se em autoclave.^ Os meios de cultura quando preparados devemser
autoclavados
para
esterilização
durante
minutos a 121ºC. A amostra a ser analisada deve ser representativado ponto selecionado.
Das
amostras
são
feitas
diluições
decimais
utilizando-se soluções contidas nos tubos. Deve-sediluir a amostra para se atingir entre 30 e 300UFC (Unidades Formadoras de Colônias) por placa. Feitas
as
diluições,
seleciona-se
as
que
serão
processadas. A seguir, retira-se 0,1 mL do tubo dadiluição selecionada e transfere-se para a placaque conterá ou não o meio de cultura, depende datécnica a ser aplicada.
Marcar na placa a amostra, a diluição, o volume deamostra e a data do experimento. Após
estarem
solidificadas,
as
placas
são
incubadas a 36ºC (bactérias) ou 28ºC (leveduras).Pode-se
aplicar
também
uma
temperatura
de
30ºC para bactérias e leveduras. A incubação deve ser de 24 a 48 horas e a seguiras
colônias
são
contadas.
O
experimento
deve
sempre ser feito em placas com duplicatas.
Ex. de contagem na diluição a 10
, plaqueando-se
0,1 mL Placa 1: 110 colônias Placa 2: 130 colônias Média: 120 colônias
120 x 10
3
x 0,1 = 1,2 x 10
4 /0,1 mL
120 x 10
3
x (0,1 x 10) =
1,2 x 10
5
UFC/mL