Guia de Interpretação para Contagem de Leveduras e Bolores, Notas de estudo de Engenharia Química

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Interpretação

Guia de

3M

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Petrifilm

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Placa para Contagem de Leveduras e Bolores

3M

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Petrifilm

TM

Placa para Contagem de Leveduras e Bolores

Este guia apresenta resultados das placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Leveduras e Bolores. Para mais informações, contate o representante de produtos microbiológicos da 3M do Brasil Ltda.

A Placa 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Leveduras e Bolores (YM) é um meio de cultura pronto para uso que contém um agente geleificante solúvel em água fria, nutrientes e um corante indicador para dar contraste e facilitar a contagem.

Contagem Total = 20

Contagem de Leveduras = 16

Contagem de Bolores = 4

Esta Placa 3M™ Petrifilm™ YM contém colônias de leveduras e bolores.

1

As placas nas figuras 6a e 6b são da mesma amostra. A figura 6a é uma

diluição 1:10 e apresenta colônias pequenas, pálidas e numerosas,

tornando difícil a contagem. A figura 6b é uma diluição 1:100 e mostra

como a diluição do produto, para obter uma contagem menor que 150

colônias, facilita a contagem. Como na maioria dos meios, num ambiente

altamente competitivo (como a figura 6a), o crescimento de colônias

típicas será inibido. Para amostras altamente contaminadas, como

esta, diluições maiores são recomendadas para obter uma contagem mais

precisa e maior crescimento de colônias típicas (como na figura 6b).

Contagem de Leveduras e Bolores = 0 Contagem de Leveduras e Bolores = 0

6b

7 8

As Placas 3M™ Petrifilm™ YM utilizam o corante indicador da fosfatase. Por essa razão, alguns produtos alimentícios que contêm fosfatase

podem causar uma reação de cor azul na Placa 3M™ Petrifilm™ YM. Dois tipos de reações de cor são encontradas: uma coloração de fundo

azul uniforme ou pontos azuis intensos. A figura 7 mostra uma coloração de fundo azul uniforme e a figura 8 mostra um ponto azul intenso,

muitas vezes encontrado em condimentos e produtos granulados. A figura 8 também mostra partículas de alimentos que produzem fosfatase.

Para reduzir a reação da fosfatase, siga uma ou mais das técnicas a seguir:

1. Dilua a amostra: Diluições maiores da amostra irão minimizar a coloração azul de fundo ou reduzir o número de pontos azuis intensos.

2. Preparo da amostra: Misture a amostra e deixe sedimentar por 3 a 5 minutos antes de plaquear. Pipete a amostra da porção central

do recipiente ou use saco para homogeneização com filtro a fim de evitar o plaqueamento de partículas.

3. Observe e anote: Observe as placas dentro de 24-36 horas de incubação e anote qualquer mudança de cor a fim de auxiliar na

interpretação final.

Reação de Fosfatase

6a

Contagem de

Bolores ~INC

Contagem de

Bolores = 64

4 5 6

2 3

Prepare a diluição da amostra. Pese ou pipete a amostra num recipiente estéril, como saco para homogeneização ou frasco de diluição.

Misture ou homogeneize a amostra utilizando métodos de rotina.

Refrigere os pacotes fechados a < 8ºC. Use antes da data de vencimento impressa na embalagem. Antes do uso, deixe os pacotes atingirem a temperatura ambiente para abri-los.

Para selar os pacotes abertos, dobre a extremidade e sele com fita adesiva.

Para prevenir contra a exposição à umidade, não refrigere os pacotes abertos. Mantenha os pacotes re-selados num lugar fresco e seco por até um mês. Evite expor as placas a uma temperatura > 25ºC e/ou umidade relativa > 50%.

Petrifilm Petrifilm

Petrifilm

Armazenamento

Preparo da Amostra

1

Para informações detalhadas sobre PRECAUÇÕES, REJEIÇÃO DE GARANTIAS/RECURSO LIMITADO, RESTRIÇÕES DE RESPONSABILIDADE DA 3M, ARMAZENAMENTO E DESCARTE E INSTRUÇÕES DE USO VEJA A BULA DO PRODUTO.

Adicione a quantidade adequada de um dos diluentes estéreis a seguir: tampão fosfato de Butterfield, água peptonada 0,1%, diluente salina peptonada (método ISO 6887-1), solução salina (0,85 – 0,90%), caldo letheen sem bissulfato ou água destilada.

Não use tampões contendo citrato, bissulfato ou tiossulfato; eles podem inibir o crescimento. Se o tampão citrato for indicado no procedimento padrão, substitua-o por um dos tampões listados acima, pré-aquecido a 40-45ºC.

Não é necessário ajustar o pH da amostra, contudo, amostras com pH ajustado podem ser usadas.

3M

TM

Petrifilm

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Instruções de Uso Placa para Contagem de Leveduras e Bolores

Contagem de Leveduras = 43

A figura 9 mostra colônias típicas de leveduras.

Características típicas de leveduras incluem:

• A colônia é pequena
• A colônia tem borda definida
• A cor da colônia pode variar de pálida a

azul-esverdeada

• A colônia pode aparecer elevada
• A cor da colônia é uniforme sem foco no centro

(centro mais escuro)

Contagem de Bolores = 29

A figura 10 mostra colônias típicas de bolores.

Características típicas de bolores incluem:

• A colônia cresce espalhada
• A colônia tem borda difusa
• A cor da colônia pode variar, pois os bolores

produzem uma variedade de pigmentos (marrom,

bege, laranja, azul-esverdeado)

• A colônia aparece plana
• A colônia usualmente tem um foco no centro

(usualmente mais escuro, mas também pode ser de

cor diferente)

9 10

Diferenciação Macroscópica

Se for necessário diferenciar colônias de leveduras e bolores nas Placas 3M™ Petrifilm™ Leveduras e Bolores,

procure uma ou mais das seguintes características típicas, mencionadas abaixo.

Para isolar as colônias para posterior identificação, levante o filme superior e remova a colônia do gel usando uma alça ou dispositivo similar.

Figura 11 Figura 12 Figura 13 Figura 14 Figura 15 Transfira a colônia para uma lâmina de microscópio com uma gota de água estéril e cubra com uma lamínula. Observe o microscópio de imersão (óleo).

As leveduras são tipicamente ovais e podem mostrar brotamento.

Os bolores aparecem tipicamente como filamentos (micélio) retos ou ramificados.

Os bolores mostrados acima estão em diferentes estágios de germinação.

Leveduras e bolores estão relacionados e nem sempre podem ser distinguidos um do outro sem exame microscópico.

Diferenciação Microscópica

Microbiologia 3M do Brasil Ltda.

Via Anhanguera, km 110 13181-900 - Sumaré - SP

Junho/

Bretas