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Microbiologia
MEIOS DE CULTURA
Formulações químicas (associação qualitativa e quantitativa) Nutrientes necessários Multiplicação (desenvolvimento e cultivo) Cultivo e isolamento (estudo e análise) Destinam-se ao cultivo artificial dos microrganismos e fornecem os princípios indispensáveis ao seu crescimento. O que são: Materiais nutrientes preparados no laboratório para crescimento e multiplicação de microrganismos Substratos naturais ou artificiais Devem atender as exigências de fontes de C, N, energia e sais minerais. Função: Isolamento, cultivo, preservação, estudos morfológicos Quanto a Consistência: Líquidos: isolamento, formato, cor e tamanho da colônia formada. Sólidos: cultivo, formação de gás, odor e alterações no pH produzidas pelas bactérias, preservação. Semi-sólidos: a diferença entre esses tipos é a quantidade de ágar que é acrescentada ao meio. ÁGAR:
- polissacarídeo que tem muitas propriedades que o tornam um agente solidificante ideal, formado por extrato de algas marinhas, é usado na preparação de meios sólidos;
- Utilizado em uma concentração em torno de 1,5% (p/v), ou 1,5 g/100ml
- Funde-se em torno do ponto de ebulição da água (100°C), formando uma solução transparente que permanece no estado líquido em torno de 40 °C. Quanto a Composição: Naturais: material natural com composição desconhecida Ex: Extrato de Malte, batata, extrato de carne. Sintéticos: composição química conhecida Semi-sintéticos: quando não se conhece a composição de alguns componentes do meio Ex: Batata-dextrose-ágar (BDA)
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Quanto a Especificidade: Gerais: utilizados por uma ampla gama de microrganismos Seletivos: Específicos para isolamento, crescimento e multiplicação de determinadas espécies ou Gênero de microrganismos Condições de cultivo: Bactérias: PH neutro Fungos: Condições ácidas Os meios, após sua preparação, devem ficar sobre o balcão ou interior da câmara de fluxo laminar até o esfriamento à temperatura ambiente. Quando a quantidade de meios preparados é pequena e de uso imediato, eles devem ser armazenados em geladeira e, preferencialmente, dentro de sacos plásticos para evitar maior desidratação. Vírus: não crescem em meios de cultura Ex: Fitovírus Sobrevivem nas células vivas do Hospedeiro Meio de Cultura: Planta Inoculação: introdução do vírus por meio de micro ferimentos em presença de Soluções Tamponantes no tecido vegetal do Hospedeiro, sobrevivência e o crescimento dos microrganismos depende do suprimento de nutrientes e de ambiente físico favorável CRITÉRIOS PARA O CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS EM MEIOS DE CULTURA Componentes nutricionais corretos, em quantidades e porção Condições adequadas de incubação PH ajustado Estéril / / # N P ①
CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL
MEIOS DE CONTAGEM: Determinação quantitativa: ÁGAR de contagem em placas, ÁGAR Baird-Parker MEIOS DE ESTOCAGEM OU MANUNTENÇÃO: Conservação de microrganismos: ÁGAR Sabouraud MEIOS DE TRIAGEM: Caracterização e identificação: Tríplice açúcar e ferro MEIOS DE INDENTIFICAÇÃO: Provas bioquímicas e verificação de funções fisiológicas: ÁGAR Citrato, caldo nitrato CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL MEIOS DE PRÉ ENRIQUECIMENTO Analise de material desidratado Recuperação de organismos danificados Recuperação da célula antes da inoculação EX: Água peptonada e caldo lactosado: isolamento de Salmonella MEIOS DE ENRIQUECIMENTO Proporcionam nutrientes ao crescimento de microrganismos Inibem também a presença de microrganismos competidores EX: Caldo tetrationato e Selenito-cistina: Salmonella sp. Caldo Trioglicolato: Clostridium perfringens MEIOS DIFERENCIAIS Permite estabelecer diferenças entre microrganismos parecidos Facilita a identificação da bactéria quando existem outras bactérias crescendo no mesmo meio EX: ÁGAR Sangue, que contém células vermelhas do sangue, é muito utilizado pelos microbiologistas para identificação de espécies bacterianas capazes de destruir células sanguíneas MEIOS SELETIVOS Possuem substancias que inibem o desenvolvimento de um determinado grupo de microorganismos favorecendo o crescimento de outras espécies EX: Meios com sais biliares e verde brilhante para isolamento seletivo de microrganismos como a Salmonella
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PROCESSOS DE PREPARAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA
ESTERILIZAÇÃO, ASSEPSIA E PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
CONCEITOS
ANTI-SEPSIA: Inativação ou redução do número de microrganismos presentes em um tecido vivo, com substâncias anti-sépticas DESINFESTAÇÃO: Inativação ou redução do número de microrganismos presentes em um material inanimado, não implicando na eliminação de todos os microrganismos viáveis, porém elimina a potencialidade infecciosa do objeto ou superfície de trabalho (eliminação de microrganismos patogênicos) ASSEPSIA: Impede a entrada de microrganismos em áreas de trabalho Todas as condições, gestos e atitudes que tendem a manter o estado de ausência de microrganismos contaminantes no meio em que atuam. Agentes desinfetantes: São tipicamente aplicados em objetos, superfícies. Agentes antissépticos: São aplicados em tecidos vivos Agentes desinfetantes: Álcool 70%: superfícies de trabalho e câmara de fluxo laminar, entre outros. ESTERILIZAÇÃO: eliminação de toda e qualquer forma de vida presente em um determinado material ou ambiente, sendo vírus, fungos, bactérias, protozoários e esporos •Evitar a contaminação; •As técnicas assépticas:
- minimizam a possibilidade das culturas serem contaminadas por organismos vivos do ambiente e impedem que os organismos, especialmente os patógenos, escapem para o meio. SANITIZAÇÃO: É o tratamento que leva a diminuição da vida microbiana nos utensílios alimentares e equipamentos de manipulação de alimentos até os níveis seguros da saúde pública
IMPORTANTE
Não abrir o registro antes que o manômetro atinja a posição zero, para evitar que o material esterilizado fique muito molhado e que os papéis que o envolvem se rasguem;
- Nunca abandonar o local de esterilização, conferindo sempre a temperatura da autoclave, e evitando a quebra de materiais e o RISCO DE EXPLOSÃO. ESTERILIZAÇÃO POR FILTRAÇÃO:
- Para substâncias que não podem ser esterilizadas pelo calor.
- Utilizam-se filtros apropriados
- Filtros Milipore (0,45 μ e 0,2 μ), proporcionam bons resultados de esterilização por filtração (EX: BACTÉRIAS RETIDAS NO FILTRO) c) ESTERILIZAÇÃO POR SUBSTÂNCIA GASOSAS:
- Óxido de propileno pode ser utilizado para esterilizar placas de Petri de plástico com ou sem meio de cultura
- Pilhas de placas são acondicionadas em sacos plásticos, adiciona um chumaço de algodão embebido com 3-10 ml de OP por 24 h.
- Placas devem ser retiradas em condições assépticas d) ESTERILIZAÇÃO DE SOLOS :
- Utiliza-se Autoclave a 120° C por duas horas por 2 dias consecutivos
- Após a esterilização o solo deve permanecer em repouso por 5-7 dias e) ESTERILIZAÇÃO POR RADIAÇÃO ULTRA VIOLETA
- Lâmpadas UV eficientes na eliminação ou redução de microrganismos do ar
- Utilizadas em Câmara asséptica • CUIDADO!!! ESTERILIZAÇÃO POR AGENTES QUÍMICOS:
- Brometo de metila (solos): liberado até 2015
- Desinfetantes:
- Hipoclorito de Sódio
- Álcool 70%
- Fosfato Trissódico
- Dietilpirocarbonato (DEPC): inibidor RNAses
FUNGOS
CARACTERÍSTICAS GERAIS:
SUPRA REINO: Eukarya HETEROTRÓFICOS PAREDE CELULAR RÍGIDA COM QUITINA I
ESTRUTURAS VEGETATIVAS
LEVEDURAS: Unicelulares e Ovoides FUNGOS FILAMENTOSOS Longos filamentos Ramificações verdadeiras Estrutura de frutificação DIMORFICOS LEVEDURAS Reprodução: gemulação Macroscopicamente: Formam colônias semelhantes as bacterianas FUNGOS FILAMENTOSOS: estrutura de frutificação, micélio, hifa e ramificação Tipos de HIFAS: A- Hifa septada B- Hifa cenocítica Reprodução: esporulação Ex: dente de leão Macroscopicamente: Colônias grandes, micélios aéreos e pigmentação Formação de PSEUDOHIFAS: teste de patogenicidade em tubo germinativo formado em soro por Cândida albicans DIMORFISMO FÚNGICO MICÉLIO: 23ºC LEVEDURA: 37ºC Tipos: Blastomicose, coccidioidomicose, Histoplasmose e esporotricose CARACTERÍSTICAS GERAIS IMPORTÂNCIA DOS FUNGOS: Produção de substânicas químicas Fungos comestíveis: Produção de alimentos (vinho, pão.) Fungos venenosos: Doenças de plantas, peixes e crustáceos Doenças no homem: (candidíase infra mamária) CAVENHA DA TUBERCULOSE: Bola fúngica Relacionado as fezes de aves: Histoplasmose, Criptococose S 8
SISTEMA IMUNE
As proteínas que formam as capsulas dos vírus são diferentes das proteínas existentes no corpo humano Quando sofremos alguma invasão nosso corpo reconhece estas proteínas estranhas e passa a produzir substâncias que combatem os invasores: os ANTICORPOS Os anticorpos tem ação específica, atuam somente no combate ao micro- organismo para o qual foram produzidos VACINAS Induzem nosso sistema a produzir anticorpos específicos de um determinado micro-organismo, para caso haja uma invasão já tenhamos anticorpos prontos para o combate da determinada doença SOROS Os soros já contêm em sua composição os anticorpos que o organismo necessita para curar a determinada enfermidade A preparação de soros são feitas a partir de micro-organismos mortos/atenuados, em animais como coelho, cavalo, macacos e cabras. Após a produção de anticorpos feita pelos animais, parte do sangue deles é coletado e são utilizadas técnicas para isolar e produzir os soros. VIROSES São causadas por vírus Viroses não tem cura, e os medicamentos utilizados aliviam somente os sintomas do paciente EX: Gripe, HIV, dengue, febre amarela, poliomielite. VIRUS COMO ALIADOS Podem ser utilizados no controle biológico (agropecuária) Virus de importância ortodôntica ↑ - / ↑ - - / I / I
