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Resumo de Tese / Thesis
Avaliação da técnica de PCR em tempo real no diagnóstico da infecção
pelo HTLV-I
Evaluation of real time PCR technique in diagnosis of infection to HTLV-I
Bruna C. Arruda
Dissertação apresentada ao programa de Pós-Graduação em Saúde Pública do Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães (CPqAM),
da Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz), para obtenção do título de Mestre em Ciências, área de Concentração Saúde Pública.
Correspondência: Bruna C. Arruda
Departamento de Imunologia, Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães – CPqAM / Fiocruz
Av. Moraes Rego, s/n – Cidade Universitária
50670-420 – Recife-PE – Brasil
E-mail: yara@cpqam.fiocruz.br
Orientadores:
Yara M. Gomes
Wayner V Souza
Resumo
Os vírus linfotrópicos de células T humanas do tipo I (HTLV-
I) e do tipo II (HTLV-II) são retrovírus humanos que causam des-
truição e/ou transformação nos linfócitos T. A transmissão ocorre
através de relações sexuais, transfusões sangüíneas e produtos
hemoderivados, agulhas e seringas contaminadas, da mãe infectada
para seu filho, especialmente através do aleitamento materno. No
Brasil, cerca de 750.000 pessoas sobrevivem com o vírus. O diag-
nóstico da infecção pelo HTLV-I/II é feito, habitualmente, com tes-
tes sorológicos, baseados na pesquisa de anticorpos contra antígenos
do vírus presentes no soro do indivíduo infectado. Como os genomas
provirais do HTLV-I e HTLV-II exibem grande homologia, há uma
expressiva sororeatividade cruzada. Assim, em muitos casos, a
detecção de anticorpos anti-HTLV-I/II embora caracterize a infec-
ção viral, não permite que se estabeleça a distinção entre ambos os
agentes. Os testes moleculares empregados para o diagnóstico dos
vírus HTLV-I/II, baseiam-se na pesquisa de seqüências genômicas
provirais permitindo, com isso, o diagnóstico da infecção antes do
aparecimento de qualquer sinal ou sintoma. A carga proviral de
HTLV em indivíduos infectados pode ser determinada através da
utilização da PCR em tempo real, uma técnica mais rápida e com
menor risco de contaminação que a PCR simples ou nested PCR.
Para isso, 63 amostras, sendo 33 amostras de indivíduos com
sorologia reagente para HTLV e 30 amostras de doadores de sangue
da Fundação Hemope foram analisadas para identificação do tipo
viral (I ou II) e determinação da carga proviral. A sensibilidade da
PCR qualitativa, para identificação do tipo viral, em relação à
sorologia (ELISA), foi de 87,9% (IC 95%: 70,1 - 95,0%) e a espe-
cificidade foi de 100% (IC 95%: 85,9 - 100,0%). Já a sensibilidade
e especificidade da PCR em tempo real foram de 100% (IC 95%:
86,7 - 100,0%) e 96,67% (IC 95%: 80,9 - 99,8%), respectivamente.
A carga proviral dos indivíduos reagentes na sorologia variou entre
13 cópias/106 células PBMC e 343820 cópias/106 células PBMC.
Nosso estudo também observou que os indivíduos com PET/MAH
tiveram carga proviral mais elevada que a dos indivíduos assin-
tomáticos. A utilização da PCR em tempo real na rotina de
monitoramento clínico dos indivíduos infectados permitirá um pa-
pel relevante na identificação do vírus e na determinação simultânea
da carga proviral, contribuindo para direcionar um tratamento ade-
quado.
Palavras-chave: Vírus linfotrópicos de células T humanas;
diagnóstico; PCR em tempo real; carga proviral.
Abstract
The human lymphotropic T cell virus type I (HTLV-I) or
type II (HTLV-II) are human retrovirus that cause the destruction
or transformation of the T lymphocytes. Its transmission occurs
through sexual intercourse, blood and hemocomponents transfusions,
contaminated needles and syringes, from mother to child, especially
through breast feeding. In Brazil, 750000 people live with the
infection. The diagnosis of the HTLV-I-II infection is usually done
by serologic tests based on the detection of antibodies against viral
antigens in the infected serum. Since the proviral genomes of the
HTLV-I and HTLV-II have great homology, there is an expressive
cross reactivity. Therefore, in many cases, although the detection of
HTLV antibodies characterizes the viral infection, it does not allow
the establishment of the viral type. Molecular tests used to diagnose
the HTLV-I/II viruses are based on the search of the proviral genomic
sequences, and allow the diagnoses of the infection before the
appearance of any sign or symptom. The HTLV proviral load in
infected individuals can be determined through real time PCR, a
faster and less contaminating method than the simple PCR or the
nested PCR. We analyzed 63 samples, from the Fundação Hemope,
which 33 were samples from HTLV seropositive individuals and 30
samples from blood donors, to determine the viral type and the
proviral load. The qualitative PCR sensitivity in comparison to the
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