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PCR AULA - PCR AULA
Tipologia: Notas de aula
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rfcarvalho@ibb.unesp.br
Reação para amplificação de segmento específico de DNA
Ex: Éxon específico de uma gene humano
Polymerase Chain Reaction (PCR)
...as oito ou dez horas de um dia de granizo de fevereiro que passou, com frio e faminto, vadeando os baixios...”Eu não tinha nada para comer ou beber, estava ensopado, minhas mãos estavam semicongeladas e eu estava gelado até a medula; mas, cavalheiros, fui amplamente recompensado: tornei-me o feliz possuidor de nada menos que três destas belas criaturinhas”, e exibia um frasco contendo três animais em forma de vesícula (lesmas do mar), quase impossíveis de se ver a olho nu.
XEROX MOLECULAR
Capaz de duplicar parte de uma “sentença”
...as oito ou dez horas de um dia de granizo de fevereiro que passou, com frio e faminto, vadeando os baixios...”Eu não tinha nada para comer ou beber, estava ensopado, minhas mãos estavam semicongeladas e eu estava gelado até a medula; mas, cavalheiros, fui amplamente recompensado: tornei-me o feliz possuidor de nada menos que três destas belas criaturinhas”, e exibia um frasco contendo três animais em forma de vesícula (lesmas do mar), quase impossíveis de se ver a olho nu.
...as oito ou dez horas de um dia de granizo de fevereiro que passou, com frio e faminto, vadeando os baixios...”Eu não tinha nada para comer ou beber, estava ensopado, minhas mãos estavam semicongeladas e eu estava gelado até a medula; mas, cavalheiros, fui amplamente recompensado: tornei-me o feliz possuidor de nada menos que três destas belas criaturinhas”, e exibia um frasco contendo três animais em forma de vesícula (lesmas do mar), quase impossíveis de se ver a olho nu.
Polymerase Chain Reaction (PCR)
XEROX MOLECULAR Capaz de copiar e multiplicar parte de uma “sentença”
Polymerase Chain Reaction (PCR)
INVENÇÇÇÇÃO DA PCR
Polymerase Chain Reaction (PCR)
1952 - Watson & Crick 1952 Modelo da molécula de DNA 1971 - Gobind Khorana: Princípio: replicação de um pedaço de DNA →→→→ 2 primers
1985 - Kary B. Mullis →→→→ amplificação Limitações:
INVENÇÇÇÇÃO DA PCR
INVENÇÇÇÇÃO DA PCR
1976 - Thomas D. Brock DNA polimerase termoestável de Thermus aquaticus
Polymerase Chain Reaction (PCR)
INVENÇÇÇÇÃO DA PCR
1976 - Thomas D. Brock DNA polimerase termoestável de Thermus aquaticus 1985 - Saiki RK, Scharf S, Faloona F, Mullis KB, Horn GT,Erlich HA, Arnheim N Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequencesand restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science. 1985; 230 (4732): 1350-4. 1987 - Mullis KB, Faloona FA 1993 - Prêmio Nobel de Química^ Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzedchain reaction. Methods Enzymol. 1987; 155: 335-50.
Polymerase Chain Reaction (PCR)
PRINCÍPIO DA TÉCNICA
28-35 ciclos
Polymerase Chain Reaction (PCR)
Polymerase Chain Reaction (PCR)
termociclador
banho-maria
desnaturação anelamento elongaelongaelongaelongaççççãoãoãoão
PCR
Polymerase Chain Reaction (PCR)
COMPONENTES DA REAÇÃO
Polymerase Chain Reaction (PCR)
COMPONENTES DA REAÇÃO
CCCCáááálculolculolculolculo dadada TemperaturadaTemperaturaTemperaturaTemperatura de Anelamentode Anelamentode Anelamentode Anelamento Td = 4 (G + C) + 2 (A + T)
Polymerase Chain Reaction (PCR)
Antes
PCR
Antes
Polymerase Chain Reaction (PCR)
30 ciclos de PCR30 ciclos de PCR30 ciclos de PCR30 ciclos de PCR
Polymerase Chain Reaction (PCR)
PCR
APLICAÇÕES
Polymerase Chain Reaction (PCR)
APLICAÇÕES
Polymerase Chain Reaction (PCR)
APLICAÇÕES
Polymerase Chain Reaction (PCR)
APLICAÇÕES
Polymerase Chain Reaction (PCR)
Polymerase Chain Reaction (PCR)
APLICAÇÕES
Polymerase Chain Reaction (PCR)
PCR
