UNIVERSIDADE DO PLANALTO CATARINENSE.
2ª fase de biomedicina
RELATÓRIO DE BIOQUÍMICA
Determinação da glicose por Espectrofotometria
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RELATÓRIO DE BIOQUÍMICA Determinação da glicose por Espectrofotometria, Provas de Biomedicina
Relatório de Bioquímica
Tipologia: Provas
2011
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Compartilhado em 29/06/2011
natali-steil-6 🇧🇷
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UNIVERSIDADE DO PLANALTO CATARINENSE.
2ª fase de biomedicina
RELATÓRIO DE BIOQUÍMICA
Determinação da glicose por Espectrofotometria
UNIVERSIDADE DO PLANALTO CATARINENSE.
2ª fase de biomedicina
RELATÓRIO DE BIOQUÍMICA
Determinação da Glicose por Espectrofotometria
Relatório apresentado pelas acadêmicas:
Caroline I. Costa
Giovana Zago
Jesuelen Andrade
Natali Steil.
INTRODUÇÃO
A glicose, um monossacarídeo, é o carboidrato mais importante na biologia. As células a usam como fonte de energia e intermediário metabólico. A glicose é um dos principais produtos que inicia a respiração celular em procariontes e eucariontes. As moléculas de glicose são transportadas para dentro das células por um hormônio, a Insulina. Quando a produção de insulina é deficiente, a glicose se acumula no sangue e na urina, causando deficiência nutricional às células. Este distúrbio metabólico é chamado de diabetes, e é classificada de acordo com a causa inicial da insuficiência de insulina. Em uma pessoa que não tenha diabetes, o corpo mantém o nível de glicose do plasma entre as refeições com uma variação de 70 a 99 miligramas por decilitro (mg/ dl). Depois de comer, o nível da glicose sobre, dependendo do tamanho e do conteúdo da refeição, mas não ultrapassando a 139 mg/dl e voltam rapidamente para os níveis
PROCEDIMENTOS
O sangue obtido para a análise é originado do HEMOSC (Hemocentro), onde já foi coagulado e passou pelo processo de centrifugação. A coagulação é necessária para garantir que as moléculas de fibrina não prejudiquem a análise. Utilizamos dois tubos de ensaio, e com a pipeta do tipo TD, foram pipetados em cada tubo, dois mL do reagente de cor. Um dos tubos de ensaio foi nomeado com a letra P (solução padrão) e o outro nomeado com a letra A (solução amostra). No tubo de ensaio P, que continha o reagente de cor, acrescentamos 20L da solução padrão de glicemia. No tubo de ensaio A, pipetamos 20L de plasma sanguíneo. Os tubos foram agitados para que ocorresse maior oxigenação das soluções finais, e posteriormente colocados em banho-maria por 15 minutos a uma temperatura de 37°C. O controle da temperatura é verificado com atenção, para que a temperatura não eleve-se demasiadamente causando a desnaturação das soluções. Observa-se alteração na coloração nos tubos de ensaio que contém a amostra e a solução padrão. As soluções, bem como o reagente de cor, são colocadas em cubetas. A primeira cubeta continha a chamada substância branca, havendo apenas o reagente de cor para calibração do espectrofotômetro. A segunda cubeta continha a solução de amostra, e a terceira cubeta continha a solução padrão. No espectrofotômetro foram regulados os valores de absorbância e de transmitância para a substância branca, os quais seriam zero de absorbância (não absorve nada de luz) e 100% de transmitância (deixa passar toda a luz).
Base Padrão Amostra Reagente de cor 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL Solução padrão (tubo P) -- 20L -- Amostra (tubo A) -- -- 20L
RESULTADO
Leitura do espectrofotômetro. Comprimento de onda: 500 nm.
Absorbância: Solução padrão: 155 Solução da amostra: 163 Solução branca: 0
Transmitância: Solução padrão: 69,9% Solução da amostra: 68,7% Solução branca: 100%
CONSIDERAÇÕES FINAIS
Para a obtenção do valor final de glicemia no sangue, são utilizados apenas os valores de absorbância da solução padrão e da amostra, e o valor de transmitância da substância branca. Para determinar o valor, é utilizado um cálculo, que é similar a uma regra de três. A absorbância da solução padrão foi de 0, 155 o que corresponde a 100% de absorção da luz. Já a solução de amostra, teve absorbância de 0, 162, que corresponde a um valor desconhecido de absorção da luz. Segundo o método, quanto maior for da absorção da luz, maior é a quantidade de glicose no sangue, então para determinar a quantidade de glicose no sangue, é necessário descobrir qual é esse valor de absorção da luz na solução de amostra.
CÁLCULO: (absorbância padrão x 100 = absorbância da amostra x ‘X’).
0, 162 - X
100. 0, 162 = 0, 155. X
16.2/0, 155 = X
X = 104,
(valor de glicose encontrado no plasma sanguíneo analisado)