UNIVERSIDADE SANTO AMARO- UNISA
Biomedicina
Gabrielle B. Rodrigues
Kamila Silva Bueno Miranda
Luana Feliciano de Moura
Mayara Candido de Oliveira Santos
Mayara da Silva Pereira
Relatório de coloração de Gram e Papanicolaou
São Paulo
2021
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Relátorio de coloração de Gram e Papanicolaou, Resumos de Citologia
Relatório científico sobre aula prática realizada em laboratório.
Tipologia: Resumos
2021
1 / 19
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UNIVERSIDADE SANTO AMARO- UNISA
Biomedicina
Gabrielle B. Rodrigues
Kamila Silva Bueno Miranda
Luana Feliciano de Moura
Mayara Candido de Oliveira Santos
Mayara da Silva Pereira
Relatório de coloração de Gram e Papanicolaou
São Paulo
Gabrielle B. Rodrigues
Kamila Silva Bueno Miranda
Luana Feliciano de Moura
Mayara Candido de Oliveira Santos
Mayara da Silva Pereira
Relatório de coloração de Gram e Papanicolaou
Relatório de aula prática para a obtenção de nota parcial do curso de Biomedicina para a disciplina de Citopatologia e Histotecnologia da Universidade Santo Amaro-UNISA para a Prof° Ms. Priscila Paruci.
São Paulo
- Figura 1: Materiais utilizados na coloração de Gram…………………………………...
- Figura 2: Materiais utilizados na coloração de Papanicolaou ……………………....…
- Figura 3: Verniz, pipeta pasteur e lamínula usados na finalização……………….. ….
- Figura 4: Lâmina recém corada de Gram……………………………. ………………...
- Figura 5: Lâmina recém corada de Papanicolaou…………………...……………..…..
- Figura 6: Resultado da coloração de Gram…………………………………….……….
- Figura 7: Resultado da coloração de Gram…………………………..………………....
- Figura 8: Resultado da coloração de Papanicolaou………………....………………...
- Figura 9: Resultado da coloração de Papanicolaou…………………….……………..
- 1.INTRODUÇÃO ...…………………………………………………………………………. SUMÁRIO
- OBJETIVO ………………………………………………………………………………..
- 2.1 Objetivo Geral ……………………………………………………………………..
- 2.2 Objetivo Específico ………………………………………………………………...
- MATERIAIS ……………………………………………………………………………….
- 3.1 Coloração de Gram ………………………………………………………………..
- 3.2 Coloração de Papanicolaou ……………………………………………………...
- MÉTODOS ………………………………………………………………………………..
- 4.1 Coloração de Gram ………………………………………………………………..
- 4.2 Coloração de Papanicolaou ……………………………………………………..
- RESULTADO …………………………………………………………………………….
- 5.1 Coloração de Gram ……………………………………………………………….
- 5.2 Coloração de Papanicolaou ……………………………………………………..
- 5.3 Questões realizadas em sala sobre a Coloração de Papanicolaou ...……….
- DISCUSSÃO …………………………………………………………………………….
- CONCLUSÃO …………………………………………………………………………..
- REFERÊNCIAS ………………………………………………………………………….
1. INTRODUÇÃO
A coloração de Gram é um importante teste realizado nos laboratórios de microbiologia, sendo um recurso auxiliar no diagnóstico de doenças bacterianas. A coloração de Gram envolve uma série de procedimentos antes de chegar à etapa final de leitura da lâmina preparada: envolve a confecção do esfregaço, sua fixação e passa pela coloração propriamente dita ¹. Neste estudo avaliou-se a influência de variações na referida coloração considerando os tempos de exposição aos corantes Cristal Violeta e a Fucsina de Gram e o emprego ou não de lavagens com água entre as etapas ¹. A citopatologia é uma técnica de diagnóstico que examina células de vários locais do corpo para determinar a causa ou a natureza da doença ². Os espécimes de células são processados em lâminas e examinados microscópicamente para o diagnóstico de câncer, condições pré-cancerosas, tumores benignos e algumas doenças infecciosas ². O primeiro teste de citopatologia desenvolvido foi a coloração de Papanicolaou. Sendo uma coloração para exames como a colpocitologia oncótica ou citologia cervico-vaginal. Para esta técnica utiliza-se três corantes: a Hematoxilina de Gill (substituída também pela Hematoxilina de Harris), Orange G e Eosina Alcoólica (EA-36) ².
3. MATERIAIS
3.1 Coloração de Gram
- Amostra do paciente (coleta oral realizada em sala de aula);
- Lâmina;
- Abaixador de língua;
- Álcool 95%;
- Corante Cristal violeta;
- Água destilada;
- Lugol;
- Etanol- acetona;
- Corante Fucsina. Figura 1: Materiais utilizados na coloração de Gram. (Fonte: Arquivo pessoal, 2021) 3.2 Coloração de Papanicolaou
- Amostra do paciente (coleta oral realizada em sala de aula);
- Lâmina;
- Abaixador de língua;
- Álcool 95%;
- Álcool 70%;
- Álcool 50%;
- Corante Hematoxilina de Harris;
- Hcl 0,2%;
- Água destilada;
- Corante Orange G;
- Corante Eosina Alcoólica 36;
- Álcool absoluto;
- Xilol;
- Verniz;
- Pipeta Pasteur;
- Lamínula. Figura 2: materiais utilizados na Coloração de Papanicolaou. (Fonte: Arquivo pessoal, 2021) Figura 3: Verniz, pipeta pasteur e lamínula usados na finalização do processo da coloração. (Fonte: Arquivo pessoal, 2021)
Figura 4: Lâmina recém corada (Fonte: Arquivo pessoal, 2021)
- Após este processo, a lâmina precisa secar para poder ser lida no microscópio. 4.2 Coloração de Papanicolaou Esta técnica utiliza três corantes: a Hematoxilina de Harris, Orange G e a Eosina alcoólica. É um sistema de coloração utilizado para a leitura de células colhidas por raspagem em cavidades como a cervico-vaginal e mucosa oral. A coloração atua na concentração dos corantes e nas soluções, as estruturas celulares ácidas tendem a atrair cátions, tanto por adsorção como em reações químicas e as básicas com os radicais aniônicos dos corantes. O citoplasma, sendo formado por estruturas ácidas e básicas, atrairia combinações de corantes, enquanto o núcleo celular, possuindo ácidos nucléicos, seria predominantemente ácido. A primeira etapa é a fase de hidratação, a lâmina fixada em álcool 95° são mergulhadas em cubas contendo álcool em concentração decrescente (95%, 70% e 50%) assim, mudando o meio celular e deixando que água entre na célula. O primeiro corante usado é o hematoxilina, que é responsável pela coloração do núcleo (é um corante básico que cora substâncias ácidas, deixando basofílico). Então essa amostra passa por um processo de desclarificação citológica, no qual é mergulhada em uma cuba contendo HCl a 0,2% e, em seguida, lavada com água corrente.
A segunda etapa é a fase de desidratação, a amostra é submetida a concentrações de álcool crescente (50%, 70% e 95%) para permitir a coloração definitiva do núcleo e proporcionar a absorção de dois corantes pelo citoplasma, o primeiro corante dessa fase é o Orange G que é o diferenciador de citoplasma (é um corante ácido que cora substâncias básicas, deixando acidofílico), após é necessário sequência de dois álcool 95%, e o segundo corante é a Eosina Alcoólica – EA36, responsável pela coloração das estruturas ácidas do citoplasma (é um corante básico que cora substâncias mais ácidas do citoplasma, deixando cianofilica) e duas sequências de álcool 95 novamente para desidratar a amostra, tornando-o hidrofóbico. A terceira etapa é a fase de diafanização, responsável pela desidratação total das células, utilizando álcool absoluto e os espaços anteriormente com água são preenchidos por uma substância oleosa, xilol, responsável pela manutenção e preservação da morfologia celular. E a última etapa é a fase de fixação, as células são fixadas com verniz e uma lamínula, sendo finalizada para a leitura. Procedimento feito em aula: Foi feita a raspagem da boca com o abaixador de língua para se obter a amostra, em seguida foi espalhada sobre a lâmina e fixada com álcool 95%. Após a fixação foi feito os seguintes passos:
- Fase de hidratação: sequência decrescente de álcool (95%, 70% e 50%) - 45 mergulhos em cada cuba;
- Colocar na cuba com corante Hematoxilina e deixar por 5 minutos;
- Colocar na água ácida - 1 mergulho;
- Lavar na água destilada por 5 minutos;
- Fase de desidratação: sequência crescente de álcool (50%, 70% e 95%) - 45 mergulhos em cada cuba;
- Colocar no corante Orange G e deixar por 4 minutos;
- Lavar com álcool 95 - 45 mergulhos e após isso, lavar novamente com o álcool 95 - 45 mergulhos;
- Colocar no corante Eosina alcoólica 36 e deixar por 4 minutos;
- Lavar com álcool 95 - 45 mergulhos e após isso, lavar novamente com o álcool 95 - 45 mergulhos;
5. RESULTADO
5.1 Coloração de Gram Após a coleta de material, foi feita a coloração de Gram que durou cerca de 5 minutos para ser realizada. Ela apresentou os seguintes resultados: Figura 6: Resultado da coloração de Gram vista pelo microscópio. (Fonte: Arquivo pessoal, 2021) Figura 7: Resultado da coloração de Gram vista pelo microscópio. (Fonte: Arquivo pessoal, 2021)
Nessas imagens da lâmina é possível observar células da camada superficial oral, onde apresentam o núcleo e o citoplasma. É possível observar que essas células se coraram em rosa, devido à absorção da fucsina que é um corante básico que tem como princípio corar estruturas ácidas como o citoplasma 5.2 Coloração de Papanicolaou A coloração de Papanicolaou dura de 30-40 minutos devido às várias repetições em determinadas etapas da coloração. Essa coloração apresentou os seguintes resultados: Figura 8: Resultado da coloração de Papanicolaou vista pelo microscópio. (Fonte: Arquivo pessoal, 2021)
6) Qual é a composição da água ácida? R: É composta por 400 mL de álcool 50% + 0,2 mL de HCL 7) Como se chama a próxima fase da coloração de Papanicolaou? R: Fase de desidratação. 8) Quais as concentrações de álcoois a seguir? R: Álcool 50%, 70% e 95% 9) Qual é o corante usado? R: Orange G. 10) Qual é a função dos duplos álcoois? R: Lavar e fixar a coloração 11) Qual é o corante usado? R: Eosina alcoólica. 12) Como é chamada a próxima fase? R: Fase de Diafanização. 13) Quais as substâncias que fazem parte da fase de Diafanização? R: Álcool absoluto e xilol. 14) Qual é o nome da última fase? R: Fase de fixação. 15) Qual é a função do verniz? R: Fixação e proteção da coloração.
6. DISCUSSÃO
As duas colorações podem apresentar diferenças. Sendo que o método de Papanicolaou é mais utilizado pela grande demanda diagnóstica, e é a coloração aplicada em amostras de colpocitologias para diagnóstico de câncer ginecológico ³. O método de papanicolaou é usado para o diagnóstico de infecções principalmente cervicais, possibilitando a visualização de células indicadoras, alterações celulares, indicação de qual o tipo de células ⁴, o grau de maturação e a atividade metabólica celular ³. Além de ser um método preciso e eficaz, que possibilita a visualização de alterações celulares causadas pelo HPV (Papiloma Vírus Humano), que ao longo do tempo pode causar câncer ⁴. Já a coloração de Gram é útil para diagnósticos rápidos, para apontar se há presenças de bactérias e se são classificadas em Gram positiva ou Gram negativa de acordo com a sua sensibilidade ⁴. É um teste que apresenta leve sensibilidade, especificidade e valor preditivo positivo e possui as vantagens de ser um teste de fácil padronização ⁵. A coloração de Papanicolaou ou outra coloração citopatologia, não permite a identificação de algumas morfologias bacterianas, como os cocos, havendo a necessidade do diagnóstico microbiológico, como a coloração de Gram ⁶. A inflamação no trato genital inferior feminino, que não seja relacionada ao HPV, e as infecções que podem ser encontradas com o exame citológico cervico-vaginal, são poucas estudadas em conjunto com a microbiologia, dependendo ainda de qual ou quais tipos de agentes patogênicos estudados ⁶.
REFERÊNCIAS
- Freitas VR, Picoli SR. A Coloração de Gram e as Variações na sua Execução. NewLabs. 2007; ed.82; 124-128.
- Laborclin. Coloração de Papanicolaou. Pinhais; 2018.
- Caputo LFG, Mota EM, Gitirana LB. Conceitos e Métodos para formação de profissionais em laboratórios de saúde. In. Caputo LFG, Mota EM, Gitirana LB. v.2. Rio de Janeiro: EPSJV; 2010.
- Morais JA, Ferraz RRN, Leonardi MJ, Barnabé AS, Fonseca SUL, Caseiro AC, Evengelista AA, Ramos AL, Arçari DP, Abrão L, Nunes V, Fornari JV. Comparação entre os métodos de coloração de Papanicolaou e teste de Gram para o diagnóstico de vaginose bacteriana. Unisepe. 2018 jun; 44-46.
- Barreto RG. Alterações inflamatórias e processos displásicos do colo do útero e sua relação com o papilomavírus humano (HPV) em adolescentes e mulheres jovens. [dissertação]. Ouro Preto: Universidade Federal de Ouro Preto; 2007.
- Silva MPS. Alcances e limites do exame citopatológico com coloração de Papanicolaou no diagnóstico das cérvicos vaginites: um estudo citológico e microbiológico de 2169 casos de um total de 10.064. [dissertação]. Recife: Universidade Federal de Pernambuco; 2004.