Gabriela Rizzi – Capítulo 1 Histologia Básica
Introdução
Þ Histologia é o estudo das células e dos tecidos
do corpo e de como essas estruturas se
organizam para formar os órgãos.
Preparação de espécimes para exame
microscópico
Þ A pequena dimensão das células e dos
componentes da matriz extracelular faz com
que a histologia dependa do uso de
microscópios.
Þ Ao contrário das células vivas, camadas muito
delgadas de células ou de tecidos que são
possíveis de serem vistas diretamente ao
microscópio, na maioria dos casos os tecidos e
órgãos são muito espessos e não possibilitam
a passagem adequada de luz.
Þ Nesses casos, são feitos cortes histológicos
muito delgados, porém antes disso os tecidos
e órgãos passam por tais tratamentos:
FIXAÇÃO:
Þ Realizado logo após a retirada do corpo.
Þ Tem como finalidade evitar a digestão dos
tecidos por enzimas das suas células ou
bactérias, endurece os fragmentos e preserva
a estrutura e composição molecular dos
tecidos.
Þ Há dois tipos de fixação: químico, mais
frequente, e físico, menos frequente.
Þ FIXAÇÃO QUÍMICA:
o Tecidos são imersos em soluções,
chamadas fixadores, de agentes
desnaturantes ou que estabilizam as
moléculas.
o Fixadores para microscopia de luz:
formaldeído a 4% e glutaraldeído.
o Fixadores para microscópios
eletrônicos: glutaraldeído
tamponado, seguido de tetróxido de
ósmio, formando uma fixação dupla
com maior preservação dos detalhes.
Þ FIXAÇÃO FÍSICA:
o Tecidos são submetidos a um
congelamento rápido, afim de se
tornarem rígidos e prontos para serem
seccionados.
o Os cortes são feitos pelo
criostato/criomicrótomo.
o Esse método possibilita a preparação
rápida de cortes, sendo utilizado em
hospitais para analisar rapidamente
espécimes em procedimentos
cirúrgicos.
o Congelar tecidos é muito útil também
para o estudo histoquímico de
enzimas e proteínas em cortes
histológicos, pois não inativa a maioria
das enzimas e matem as proteínas em
conformações originais.
o Utilizado também no estudo de
lipídios, pois o processo de inclusão
dissolve essas substâncias.
INCLUSÃO:
Þ Após a fixação, para obter uma consistência
rígida, as substâncias são infiltradas nos
tecidos.
Þ As substancias utilizadas são a parafina –
microscopia de luz – e resinas – microscopia
de luz eletrônica.
Þ Esse processo é precedido por duas etapas:
Desidratação e clareamento.
Þ Desidratação: retirada da água de tecidos é
feita pela passagem dos fragmentos por
banhos de solução de concentrações
crescentes de etanol (70% 100%)
Þ Clareamento: o etanol é substituído por uma
substância intermediária, miscível tanto em
etanol como no meio escolhido para inclusão.
Þ Quando embebidos no solvente orgânico, os
fragmentos ficam transparentes e
translúcidos, e em seguida são colocados em
parafina derretida (56 a 60 graus Celsius)
Þ O calor causa a evaporação do solvente
orgânico e os espaços dentro dos tecidos são
preenchidas com parafina, que irão se
solidificar ficando rígido e formando um bloco.
Ele é levado a um micrótomo (instrumento
que realiza cortes), de forma a fornecer cortes
