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Uma descrição histórica sobre a invenção da cromatografia por mikhael tswett, explicando o princípio básico desta técnica de separação de substâncias. Além disso, são apresentados os diferentes tipos de cromatografia, incluindo a cromatografia em camada delgada, gasosa, líquida e supercrítica, e suas respectivas preparativas e aplicações. O texto também discute as diferenças entre cromatografia clássica e de alta eficiência, e fornece informações sobre os adsorventes utilizados em cromatografia, como silica e celulose.
Tipologia: Notas de estudo
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Collins C.H. et al, 2006 Google
Metabólitos Vegetais: origem, diversidade e aplicações
Baseado em “Fundamentos de Cromatografia” C. H. Collins, G. L. Braga, P. S. Bonato, 2006. Maria Luiza Faria Salatino
Cromatografia é um método físico- químico de separação dos componentes de uma mistura, realizada por meio da
distribuição desses componentes em duas fases, que estão em íntimo contato.
TIPOS DE CROMATOGRAFIA
*Cromatografia líquida: “Clássica” – feita em colunas de vidro, sob pressão atmosférica. Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) – utiliza-se colunas metálicas (normalmente) e pressões de fase móvel elevadas, obtidas com o auxílio de uma bomba de alta pressão.
Teve início em 1938, mas somente na década de 1960 começou a ser largamente utilizada. Vantagens:
Waters Co.
Cuba cromatográfica
Solvente (fase móvel) Solvente (fase móvel) Tempo Zero Depois de dez minutos
Solvente
FATOR DE RETARDAMENTO ou FATOR DE RETENÇÃO – RF PARA CROMATOGRAFIA PLANAR É definido pela razão entre as distâncias percorridas pela substância e pela fase móvel.
RF =dm/dr
dm^ dr
...
O mercado dispõe de uma grande variedade de adsorventes que podem ser adquiridos para a confecção de placas nos laboratórios, ou sob a forma de placas prontas, nas quais os adsorventes são espalhados em várias espessuras (para cromatografia analítica ou preparativa).
Dentre os mais usados estão a sílica (SiO 2 ), a alumina (Al 2 O 3 ), a celulose e a poliamida. SÍLICA – é um dos adsorventes mais usados. apresenta caráter fracamente ácido. é utilizada na separação de compostos lipofílicos como ácidos graxos, terpenoides, esteroides, alcaloides etc.
ALUMINA – é o mais usado depois da sílica. tem caráter alcalino, mas existe no comércio na forma neutra ou ácida. é utilizada na separação de compostos lipofílicos ex.: alcaloides, hidrocarbonetos policíclicos, aminas e vitaminas lipossolúveis. CELULOSE – tem sido empregada como suporte da fase estacionária líquida em cromatografia de partição. pode ser impregnada com alguns materiais ex.: polietilimina, carboximetil, dietilaminoetil empregada para separar nucleotídeos, proteínas e ácidos nucleicos, substâncias fenólicas.
POLIAMIDA – sua utilização vem crescendo, apesar de ser pouco aderente ao vidro. empregada com maior frequência na separação de fenóis e ácidos carboxílicos.
Cromatografia ascendente – é o método mais utilizado – a placa é colocada na cuba, quase na posição vertical, apoiada no seu fundo. A fase móvel sobe por capilaridade. A cuba deve estar perfeitamente vedada para evitar a evaporação do solvente para o meio, e dessa maneira permitir que a cuba fique saturada com a fase móvel, o que se consegue colocando papel de filtro molhado com a fase móvel nas paredes da cuba, antes do desenvolvimento do cromatograma. Cromatografia descendente – é o método utilizado para cromatografia em papel. Coloca-se a fase móvel num depósito existente na parte superior da cuba cromatográfica. No fundo da cuba coloca-se um pouco do solvente para assegurar sua saturação. A parte superior do papel é submersa na fase móvel e a cuba é fechada. A mancha é colocada na parte superior do papel.
Desenvolvimento circular – a placa (ou papel cromatográfico) fica na posição horizontal. A amostra é depositada em um círculo ao redor do centro, no qual aplica-se a fase móvel. As manchas aparecem em círculos concêntricos.
Cromatografia circular
Cromatografia ascendente^ Cromatografia descendente
Papel
Cuba
Fase móvel
Pinçapara sustentar o papel
Tampa Fase móvel
Solventepara saturaçãomanter a
Tampa Cuba Papel
Tswett - separação de um extrato^ Reprodução do experimento de cromatografia em coluna aberta.^ de folhas de espinafre por
Carregando a amostra (“Negra”) 1 o (^) Passo 2 o (^) Passo 3 o (^) Passo
Apenas uma coluna separou os três pigmentos
Fase estacionária
Fase móvel
Fase estacionária
Dependendo do estado físico da fase móvel:
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) – utiliza-se colunas metálicas (normalmente) e pressões elevadas para a fase móvel, obtidas com o auxílio de uma bomba de alta pressão.
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE)
Característica da amostra : ser solúvel na fase móvel. Mecanismo de separação: competição entre as moléculas da amostra e as da fase móvel pelos sítios ativos da fase estacionária. É uma cromatografia de partição. Eluição por gradiente : aumento da polaridade da fase móvel – devido a retenção da amostra pela fase estacionária.
